杨瑜 刘耀河 秦宁 谭柳 宋锐 侯歌 袁金金 张艳 刘宗文

(1.郑州大学第二附属医院放射治疗科，河南 郑州 450014；2.郑州大学基础医学院药理学教研室，河南 郑州 450014)

食管癌是目前临床最为常见的恶性肿瘤之一，预后效果差，5年生存率通常低于20%[1]。肿瘤细胞多通过单克隆或多克隆进行复制，有丝分裂是肿瘤细胞增殖所需要的关键步骤[2]。Ccnb1是细胞有丝分裂的调节因子[2]，在许多癌症中都有较高水平的表达[3]。Ccnb1与肿瘤的侵袭能力有密切关联[4]，即在核内Ccnb1表达水平较高的细胞，其侵袭能力较强。目前有研究表明，在多种肿瘤疾病中，环状RNA cir-ccnb1可以通过抑制ccnb1的功能影响肿瘤的发展，但在食管癌中报道鲜少。本研究通过免疫组化实验，检测ccnb1在食管癌组织中的表达量，并通过增殖、划痕实验，探讨cir-ccnb1对 ccnb1的功能以及对食管癌细胞增殖、迁移的影响。

1 材料与方法

1.1 组织、细胞来源

1.1.1 组织来源 收集郑州大学第二附属医院2014～2015年收治的60例患者手术切除的食管鳞癌标本以及癌旁正常食管粘膜组织标本。入组条件：①术前有接受过放疗或化疗的，均排除。②术式不能选择根治术的均排除。选取标本：男性42例，女性18例；65岁以上(含65岁)32例，65岁以下28例。Ⅰ、Ⅱ期32例，Ⅲ、Ⅳ期28例；淋巴结转移31例，无转移29例。

1.1.2 细胞系 正常食管上皮细胞(Het1-A)和食管鳞癌细胞(EC109)均由郑州大学基础医学院馈赠。

1.2 免疫组化与蛋白免疫印迹

1.2.1 免疫组化 新鲜标本进行多聚甲醛固定，过夜后石蜡包埋，切成3 μm厚度切片。石蜡切片进行脱蜡、水化，抗原修复后阻断内源性过氧化物酶，封闭。……