马晓丽，张晓陶，杨 桦,3*

(1.宁夏医科大学 中医学院，宁夏 银川 750004； 2.宁夏自治区第三人民医院，宁夏 银川 750021； 3.宁夏医科大学 回医药现代化教育部重点实验室，宁夏 银川 750004)

慢性软组织损伤是临床常见病之一，是骨骼肌、筋膜韧带、关节囊、骨膜以及脂肪等运动系统软组织损害性病变的简称，其中以骨骼肌损伤最为常见，其病理基础主要为损伤引起的慢性无菌性炎症，引起肌痉挛、肌萎缩、瘢痕形成和粘连，导致局部血液循环障碍、组织缺血缺氧而产生疼痛[1]。目前，针对慢性骨骼肌损伤的认识及其机制研究已经成熟，但是在治疗方面仍需进一步研究。现常见治疗方法西医有口服非甾体类抗炎药物、手术治疗等；中医有内热针治疗、中药口服、针刺治疗、推拿治疗及刮痧治疗等。长期服用非甾体类抗炎药物可带来胃肠道损伤等副作用[1]；手术治疗风险高且价格昂贵；内热针治疗术后会出现局部肿胀疼痛无力。中药治疗对急性软组织损伤更有效，比较之下，针刺治疗、推拿治疗及刮痧治疗优点显著，其安全无副作用、操作方便、费用低且效果佳。故本研究通过研究针刺、推拿及刮痧3种方法对慢性骨骼肌损伤模型大鼠血清LDH活性的作用及影响，以明确针刺、推拿及刮痧在慢性骨骼肌损伤中的治疗效果，现报道如下。

1 材料与试剂

1.1 实验动物

健康雄性SD大鼠59只，鼠龄4～6周，体质量200～220 g，由宁夏医科大学实验动物中心提供(许可证号：SCXX(宁)2015-0001)。

1.2 针具

华佗牌一次性无菌针灸针，规格:0.30 mm×13 mm (苏州医疗器械公司)。

1.3 仪器及主要试剂

TD5KR型高速离心机(长沙东旺实验仪器有限公司)；CKX31显微镜(OLYMPUS Corporation，日本)；LDH检测试剂盒(武汉基因美生物科技有限公司)； 五车道跑步机LE8710RTS(东乐自然基因生命科学有限公司)。

2 方法

2.1 动物分组

从59只大鼠中随机抽出6只作为空白对照组，剩余53只大鼠为实验组，对实验组大鼠进行慢性骨骼肌损伤模型制备，造模结束后，从空白对照组和实验组中各随机抽出3只以检测造模是否成功，然后将剩余50只实验组大鼠随机分为模型对照组、自然恢复组、刮痧组、推拿组及针刺组，每组10只。

2.2 慢性骨骼肌损伤模型制备与评价

选用经典大鼠下坡跑离心收缩模型诱导动物的慢性骨骼肌损伤模型。该模型由Armstrong[2]设计建立，以鼠类动物跑台为实验仪器，跑台坡度为-16°，速度为18 m/min，持续时间为90 min以上。本实验动物模型制备在Armstrong模型方案的基础上延长运动时间，使运动大鼠每日运动时间达到150 min，运动时间为28天，以更好地诱导动物慢性骨骼肌损伤模型的形成。运动过程中可使用声、光或毛刷刺激大鼠尾部，使动物始终保持在跑台跑道的前1/3处，以保证跑台上大鼠的运动强度。运动结束后，将动物放回笼内休养。

慢性骨骼肌损伤模型的评价采用HE染色法，观察空白对照组和实验组骨骼肌(股外侧肌)组织病理变化，并用ELISA法检测血清中LDH活性，以判断造模是否成功。于造模结束后随机抽取实验组及空白对照组大鼠各3只，麻醉后取其股外侧肌及心脏血后处死。对其股外侧肌做HE染色观察组织病理，经20倍光学显微镜观察成片后结果如图1、图2所示：实验组大鼠股外侧肌肌纤维断裂，组织水肿，炎细胞浸润、纤维组织增生明显且细胞界限不清；空白对照组肌纤维排列整齐，细胞界限清楚，无组织水肿及炎细胞浸润，有少量纤维组织增生。

图1 实验组股外侧肌组织病理(HE染色，×20)

图2 空白对照组股外侧肌组织病理(HE染色，×20)

采用ELISA法检测其心脏血血清中LDH的活性变化，结果空白对照组LDH活性为(73.757±7.643)，实验组为(136.149±3.959)，经统计学分析，实验组和空白对照组比较，血清中LDH活性差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果及血清中LDH 活性变化分析均说明实验组大鼠慢性骨骼肌损伤模型已建立成功。

2.3 治疗方法

2.4 取材及指标检测

所有大鼠予以10%水合氯醛腹腔内注射麻醉后进行胸腔穿刺心脏取血5 mL，置于离心管内，静置30 min后以3 000 r/min离心10 min，取上层血清，置于-80 ℃超低温冰箱保存，以进行血清LDH活性检测，然后将大鼠处死。血清LDH活性检测采用ELISA法进行。

2.5 统计学方法

3 结果

3.1 固定对大鼠血清中LDH活性的影响

首先对空白对照组固定与未固定大鼠血清中LDH活性变化进行统计分析(未固定数据来自判断造模是否成功时所取)，以观察固定是否会对实验结果产生影响。结果空白对照组大鼠固定与未固定其血清中LDH活性分别为：(66.279±4.295)、(67.408±5.130)，差异无统计学意义(P>0.05)，说明固定对大鼠血清中LDH的活性无影响。

3.2 干预后各组大鼠血清中LDH活性变化

干预后，针刺组、推拿组及刮痧组大鼠血清中LDH活性下降显著，均明显低于模型对照组(P<0.05)；且与自然恢复组比较，差异具有统计学意义(P<0.05)。其中针刺组与刮痧组和推拿组比较，差异具有统计学意义(P<0.05)，而刮痧组与推拿组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结果提示：针刺、刮痧及推拿均可降低慢性骨骼肌损伤模型大鼠血清中LDH活性，其中针刺影响最明显。见表1。

表1 干预后各组大鼠血清中LDH活性变化

3 讨论

慢性软组织损伤疾病是以骨骼肌、筋膜、韧带、关节囊、脂肪等软组织附着点产生的无菌性炎症为病理基础的临床常见病[4]，其中以骨骼肌损伤最为多见，属中医学“伤筋”范畴。

软组织外科学观点认为，无菌性炎症是慢性软组织损伤的病理特点, 也是产生疼痛的主要原因[5]，研究表明针刺对炎症介质存在着双向良性调节作用，能提高抗炎细胞因子水平，也能抑制致炎细胞因子的合成，减少炎症反应[6]。

中医认为可从气血、脏腑、经络三方面讨论慢性软组织损伤的病机，但无论是脏腑失和还是经络阻塞，归根结底都是因为气血运行紊乱以致气滞血瘀而出现疼痛[7]，故活血化瘀、减轻疼痛为伤筋的主要治则。足三里穴又名下陵、三里，归属于足阳明胃经，位于小腿外侧，犊鼻下3寸，犊鼻与解溪连线上，气血多行于此穴，具有提升正气、疏经通络、调气血、补虚弱等诸多功效，《灵枢·九针十二原》对五输穴经气流注特点概括为：“所出为井、所溜为荥、所注为输、所行为经，所入为合”，其中合穴经气充盛且入合于脏腑。足三里穴为足阳明胃经之合穴，是足阳明脉气充盛所入之穴，足三里同时是胃的下合穴，“合治内腑”，说明足三里穴有良好的健运脾胃的功效，能够促进脾胃受纳水谷，同时营养周身经筋，促进损伤修复[8]。刺激足三里能明显改善血液的高黏滞性，降低红细胞聚集指数，使红细胞由聚集状态成为相对分散状态，说明针刺足三里能降低血液黏稠度、减少循环阻力、加快血流速度，从而起到活血化瘀的作用[9]。刺激足三里穴位所产生的镇痛效应可被阿片样受体特异阻断剂纳洛酮所逆转，提示针刺足三里穴可激活内源性镇痛系统，促使内源性吗啡样物质释放而产生镇痛效应[10]。环跳穴又名髀枢、枢中，归属足少阳胆经，位于臀区，股骨大转子最凸点与骶管裂孔连线的外1/3与内2/3交点处，具有疏经通络、活血化瘀、止痛强筋的功效，是足少阳胆经和足太阳膀胱经的交会穴，足太阳经分布于腰、臀和下肢的整个后面，足少阳经分布于人身整个侧身部，两经之经筋结于踝、膝、腘、臀和骶部，在经脉病候上，足太阳“主筋所生病”，足少阳“主骨所生病”，说明两经脉善治筋骨病。刺激环跳穴可改善血液流变学异常，消除患者血液的“粘、浓、凝、聚”倾向，从而起到行气血、通经络的作用[11]；针刺环跳穴也可使痛觉信息经传入神经进入脊髓，经痛觉中枢及神经体液整合加工，使疼痛性质发生变化，同时释放神经介质5-羟色胺、内源性雅片等起到镇痛作用[12]。

本研究选取足三里、环跳二穴进行研究，发现针刺、推拿、刮痧均可降低大鼠血清LDH活性，说明针刺、推拿、刮痧治疗慢性骨骼肌损伤均有疗效，其中针刺影响最明显。本研究结果可供临床医师参考。