凌婵 蒋之 裴异

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)是一种复杂、多维、异质性疾病[1]，已经成为全球第三大死亡原因[2]。气道重塑是COPD的主要病理基础，也是COPD持续发展的关键因素[3-4]。迄今为止，尚无有效的COPD治疗方法和定义早期COPD的全球公认标准[5-7]。因此，迫切需要新的生物标记物用于早期检测COPD，干预疾病进展[8]。研究发现miRNA可调节COPD的病理过程[9-10]。在COPD患者的肺和血浆中均检测到miR-29b的下降[11]，而且miR-29b的水平与肺功能和炎症相关[12]；表明miR-29b可能参与COPD的进展。但是目前miR-29b调控COPD发生的程度和方式尚不清楚。MMP2可破坏肺部结构，参与气道重塑[13-14]。miR-29b可通过与MMP2 3′UTR结合而负调控MMP2[15-16]。故本研究拟进一步研究miR-29b是否能调控MMP2参与COPD的进展及其对肺支气管上皮细胞增殖迁移的影响。

资料与方法

一、实验材料

1 实验动物

SPF级健康SD雄性大鼠30只，体重(200±10)g，购自济南朋悦动物繁育有限公司，合格证号为SCXK(鲁)20140007。所有动物均严格按照动物饲养规则喂养，温度为24～26 ℃，湿度为50～60%，自由饮水和摄食。饲养3d充分适应环境后开始实验。

2 试剂及仪器

芙蓉王香烟(焦油11mg，烟气烟碱1.2mg，烟气一氧化碳11mg，湖南中烟工业公司)；脂多糖(LPS，美国Sigma公司)；HE染色试剂、RIPA裂解液和BCA试剂盒购自上海碧云天生物科技公司，批号分别为C0105、P0013B、P0012S；大鼠MMP2 ELISA试剂盒(美国Abnova，KA0393)购自武汉艾美捷科技有限公司；miRNA提取分离试剂盒、反转录试剂盒及Real-time PCR试剂盒购买于日本TaKaRa公司；Lipofectamine 2000购买于美国Invitrogen公司；PCR引物由南京金斯瑞生物科技有限公司合成；兔抗人MMP2(ab92536)、β-actin(ab8227)、山羊抗兔IgG H&L(HRP)(ab205718)均购自英国abcam公司；miR-29b模拟物(mimics)、miR-29b抑制剂(inhibitor)、mimics-NC、inhibitor-NC均由上海Gene Pharma合成；16HBE(人支气管上皮样细胞)(美国ATCC)购自上海恒远生物科技有限公司；……