谢宁 蔡妮娜

【摘要】 目的：建立五花解毒颗粒微生物限度检查方法。方法：对样品进行5种试验菌株的回收率试验及控制菌检查法的验证来确定适宜的检查方法。结果：各试验菌的回收比值在0.5～2之间，控制菌检查中试验组可检出试验菌。结论：可采用常规法进行五花解毒颗粒的微生物限度检查。

【关键词】 微生物限度检查;常规法;方法验证

【DOI编码】 10.3969/j.issn.1674-4977.2021.04.016

Methodology Validation of Microbial Limit Test of

Wuhua Jiedu Grain

XIE Ning，CAI Ni-na

（Nanning Hospital Traditional Chinese Medicine，Nanning 530001，China）

Abstract： Objective： To establish a method of microbial limit test of Wuhua Jiedu grain. Methods： The recovery tests of 5 bacterial strains and the me thodological validation of control bacteria examination method were done referring to the microbial limit test methods.Results： The recovery of the strain rate was 0.5～2，the experimental group were verified by test bacteria in the control bacteria detection. Conclusion： The Routine Method can be applied to the microbial limit test of Wuhua Jiedu Grain.

Key words： microbial limit test;routine method;method validation

五花解毒顆粒为固体口服制剂，处方含木棉花、金银花、菊花、槐花、葛花，具有清热解毒，凉血止痢的功效。根据《中国药典》四部通则相关规定，本品需检测需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数，不得检出大肠埃希菌。经方法学验证，本品的微生物限度检查方法符合规定，方法可行。

1 实验用品

1.1 菌种名称及来源

金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]、枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]、铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104]、大肠埃希菌[CMCC（B）44102]、黑曲霉[CMCC（F）98003]、白色念珠菌[CMCC（F）98001]，均购于中国食品药品检定研究院。

1.2 样品

五花解毒颗粒批号：180425、180427、180509。生产厂家：南宁市中医医院。

1.3 稀释剂及培养基

稀释剂：pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液。

培养基：沙氏葡萄糖琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培养基、麦康凯液体培养基、麦康凯琼脂培养基。均购于北京三药科技开发公司。

1.4 仪器

立式压力蒸气灭菌锅（LDZX-30FBS）、电热恒温鼓风干燥箱（DHG-9246A）、洁净工作台（SW-CJ-2FD）、生物安全柜（11231 BBC 86）、微机生化培养箱（SPX-15OB-Ⅱ）、生化培养箱（SPX-200-Ⅱ）、电热恒温培养箱（DHP-360）等。

2 计数方法的验证

2.1 菌液制备

用0.9%氯化钠溶液将枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌、白色念珠菌的新鲜培养物制成适宜浓度的菌悬液，备用;用含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液将黑曲霉孢子悬液制成适宜浓度的菌悬液，备用。……