钟 正， 阮亦铭， 俞大良， 侯 森，2

（1.暨南大学环境学院，广州511486；2.中国科学院南京土壤研究所，土壤环境与污染修复重点实验室，南京210008）

0 引 言

激光共聚焦显微镜［1］经过几十年的改进已成为科学研究的重要工具［2］，在生物学、环境学、测量学、医学、材料学中占据了重要地位。由于其卓越的光学层扫和三维构建能力［3］，激光共聚焦显微镜广泛运用于组织和细胞中的分子和结构的检测、细胞内离子浓度变化的测量、荧光相关数据的测量、长时间细胞迁移和生长的观测、三维表面的测量等生物学研究领域中［4-7］。与普通荧光显微镜相比，激光共聚焦显微镜的激发光通过针孔而排除了次级荧光干扰，形成更加清晰的图像［8］。激光共聚焦显微镜可同时对多种荧光染料标记的样本进行信息获取和构建，同时进行局部的光操作［9］。激光共聚焦显微镜要求使用厚度极薄的玻璃片（通常厚度为0.13～0.16 mm）作为样品载物装置［10］。而目前常用的载物装置在使用成本、细胞培养可行性、反复灭菌能力等诸多方面还存在着种种缺陷，无法满足细胞培养观测的使用要求。

激光共聚焦显微镜是在传统光学显微镜的基础上加装激光扫描装置，利用针孔阻断焦距外的光线以排除探测器聚焦外的光线，再利用光栅式扫描进行成像的显微镜［11］。激光共聚焦显微镜采用共轭聚焦的方式，逐点扫描观测样品，从而实现了对荧光标记样品的高分辨三维成像［12］。激光共聚焦显微镜物镜的最前端与聚焦平面的距离（即工作距离）较短［13］，通常需要使用厚度不超过0.17 mm的玻片承载被测物进行实验［14-15］。……