陈旭昕 唐 俭 李虎明 孟激光 韩志海

骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cell, BM-MSC)是一种具有自我更新和多向分化潜能的多功能干细胞[1]。研究表明，输入外源性或迁移的内源性干细胞能定植在损伤的肺组织内，分化为多种肺细胞，参与受损肺组织的修复与重构，可治疗急性肺损伤、肺纤维化和慢性阻塞性肺疾病[2, 3]。但是在疾病状态下，机体处于缺血缺氧、氧化应激、休克、炎症爆发的环境中，移植到损伤部位的MSC由于不适应恶劣的体内环境，约90%以上会死亡，大大降低了MSC在损伤修复中的疗效[4]。血红素加氧酶(heme oxygenase, HO)是一种细胞微粒体酶，参与细胞保护、凋亡和炎症[5]。已有研究表明，经血红素加氧酶-1(HO-1)修饰后的MSC耐受缺氧复氧损伤能力显著增强，并提高了MSC对受损心肌的修复能力[6]。但HO-1基因修饰增强MSCs缺氧耐受的同时是否会对MSC的“干性”特征造成影响尚缺乏直接证据证实，有待于进一步实验研究证实。因此，本研究拟以大鼠BM-MSC为研究对象，以重组慢病毒载体为介导，构建过表达大鼠HO-1基因的MSC，比较原代MSC与MSC-HO-1的增殖生长活性、免疫表型及多向分化能力的变化，以期为后续研究奠定基础。

材料与方法

1.材料：SPF级Wistar大鼠(3～4周龄，体质量为100～120g)由军事医学科学院实验动物中心提供。重组慢病毒载体Lenti-GFP-HO-1(Lenti-HO-1)及空慢病毒载体(Lenti-GFP)均购自上海吉凯基因化学技术有限公司。DMEM培养基和优质胎牛血清均购自美国Gibco公司。抗rat-HO-1多克隆抗体、抗β-actin及二抗购自美国Santa Cruz公司。考马斯亮蓝蛋白质浓度测定试剂盒及总蛋白提取试剂盒购自上海碧云天生物技术公司。……