郝怡然 陈逸歌 李 彧 刘梦妤 刘 华

临床研究发现各种肾脏疾病常伴有炎性反应，而炎症促进肾小球硬化的发生、发展[1]。血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A，SAA)作为强效炎性因子，在炎症和脂质代谢中起关键作用[2]。SAA检测有助于多种疾病的诊断和预后评估，如类风湿关节炎、动脉粥样硬化、肥胖、糖尿病肾病(diabetic kidney disease，DKD)[3～6]。最近的证据显示SAA是炎症通路的中枢介质，SAA水平在DKD早期升高，促进肾小球硬化和肾间质纤维化[7]。高脂血症常伴发于多种肾脏疾病，如肾病综合征，是促进肾小球硬化的危险因素[8]。炎性因子可能与脂质失衡共同参与了肾小球硬化的进展，观察炎性因子对细胞脂质稳态的影响是探讨脂质介导肾损伤的关键[9]。氧化低密度脂蛋白(oxidised low-density lipoprotein， Ox-LDL)植物血凝素样受体1(lectin-like oxidised low-density lipoprotein receptor 1， LOX-1)在炎症和脂质代谢紊乱相关性疾病的发生、进展中发挥重要作用[10～12]。炎性因子SAA对人肾小球系膜细胞(human mesangial cells，HMCs)LOX-1受体及脂质代谢的相关研究较少。本研究通过观察SAA对HMCs摄取脂质及LOX-1受体表达的变化，探讨炎症在细胞水平影响HMCs脂质稳态的病理、生理机制。

材料与方法

1.材料：RPMI1640培养液及胎牛血清(Foetal calf serum，FCS)(美国Gibco Life Technologies 公司)，人肾小球系膜细胞由英国皇家医学院肾脏病中心阮雄中教授惠赠，SAA(美国Peprotech Technologies公司)、Ox-LDL(中国医学科学院基础研究所)、油红“O”(美国Sigma-Aldrich公司)，荧光Dil-Ox-LDL (美国Biomed Technologies公司)、LOX-1抗体(美国R&D Systems公司)。PCR反应体系、反转录酶缓冲液(美国Promega Corporation公司)、dNTP、Oligo(dT)、引物(上海生物工程有限公司)合成，LOX-1引物序列：上游引物：5′-ACAGAGGCCATTCCGAAATCA-3′，下游引物：5′-GGTAGAGTCTGGAGATGGACCACA-3′。GAPDH 引物序列：上游引物：5′-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC -3′，下游引物：5′-ATGGTGGTGAAGACGCCAGT -3′。

2.HMCs的培养：用10%FCS的RPMI1640培养液在5%CO2培养箱37℃培养HMCs，0.01mol/L PBS冲洗，0.25%胰蛋白酶/0.025 EDTA消化，10%FCS的RPMI1640培养液悬浮细胞传代培养。……