林玉祥，林慧，车立纯，田河

1 厦门医学院附属口腔医院牙体牙髓病二科，福建厦门361000；2 厦门市口腔疾病诊疗重点实验室；3 青岛市中心医院口腔科

人牙髓干细胞（hDPSCs）具有自我更新能力、高增殖能力及多向分化能力［1］，具有众多潜在的临床治疗作用，但炎症微环境会限制其各种自我更新及分化能力，从而影响其应用［2］。微小RNA（miRNA）是一类内生的、长度为20～24 个核苷酸的小RNA，其在细胞内具有多种重要的调节作用。miRNA 表达与hDPSCs 的增殖、多向分化、衰老和其他生命过程均密切相关［3］。研究显示，miR-21 广泛参与机体炎症、凋亡、自噬等多种病理生理过程［4-6］。NARA等［7］研究发现，miR-21 可减轻脂多糖（LPS）诱导的hDPSCs 炎症反应。但是，miR-21 对hDPSCs 炎症反应、凋亡和自噬的影响鲜见报道。为此，我们于2020 年6 月—2021 年2 月进行了如下研究。

1 材料与方法

1.1 材料 细胞：hDPSCs 购自上海赛百慷生物技术股份有限公司。质粒：miR-21 mimics、miR-NC mimics均购自广州锐博生物技术有限公司。主要试剂：白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA 试剂盒均购自上海碧云天生物技术有限公司，DMEM 培养基、10%胎牛血清、青—链霉素、LPS均购自美国Sigma公司；胰蛋白酶购自美国Gibco 公司，Hoechst 染色试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司，Annexin V-FITC/PI 双染色细胞凋亡检测试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司，BCA 试剂盒购自北京百奥莱博科技公司；CD34、CD45、CD90、CD105 抗体均购自美国Thermo Fisher Scientific 公司，裂解的半胱氨酸蛋白酶3（Cleaved Caspase-3）、死骨片1（p62）、自噬微管相关蛋白轻链3 抗体（LC3B）、内参GAPDH 一抗及辣根过氧化酶标记的IgG均购自英国Abcam公司。

1.2 hDPSCs 细胞培养及鉴定 将hDPSCs 置于含10% 胎牛血清和青—链霉素双抗的DMEM 培养基中，置于37 ℃、5% CO2培养箱中。……