殷玉，王亚红，许志亮，刘刚

1 广东医科大学附属医院呼吸内科，524000；2 广东医科大学附属医院临床研究中心

大多数支气管肺癌患者是非小细胞肺癌（NSCLC），患者被诊断为NSCLC 时通常为疾病晚期，肿瘤细胞已经发生淋巴结及其他器官的转移，患者5 年生存率仅为14%［1-2］。研究显示，未发生转移的NSCLC 患者5 年生存率可达83%［3］。因此，肿瘤细胞是否发生转移对于NSCLC 患者的预后至关重要。肺癌生物标志物的鉴定有助于NSCLC 的早期诊断、治疗以及预后判断。越来越多的研究证明，微小RNA（miRNA）参与调控细胞分化、增殖和存活的各种信号通路，在多种类型的肿瘤细胞中表达异常。研究发现，miR-363-3p 参与调控胆囊癌［4］、胃癌［5-6］和胶质瘤［7］等多种肿瘤细胞的迁移与侵袭。但目前关于miR-363-3p 在发生淋巴结转移的NSCLC组织及细胞中的表达变化，以及是否对高转移性的NSCLC 细胞迁移与侵袭有直接调控作用尚不明了［8-9］。为此，我们于2020 年1 月—2021 年6 月进行了如下研究。

1 材料与方法

1.1 材料 细胞：人NSCLC 细胞株A549 及高转移性NSCLC 细胞株H441 均购自美国ATCC。主要试剂：TRIzol 试剂、细胞培养基、胎牛血清、Lipofectamine 2000 转染试剂盒均购自美国Invitrogen 公司，miRcute miRNA First-Strand cDNA Syntnesis Kit反转录试剂盒、Real-time PCR 试剂均购自北京天根生物科技有限公司，蛋白提取试剂盒购自上海碧云天生物科技有限公司，GAPDH 抗体购自上海生工生物工程科技有限公司，E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、基质金属蛋白酶3（MMP-3）抗体均购自美国Cell Signaling Technology 公司，细胞迁移测试盒购自美国BD 公 司。miR-363-3p mimics 和miR-363-3p inhibitor由上海吉玛制药技术有限公司设计合成。

1.2 发生和未发生淋巴结转移的NSCLC 组织miR-363-3p 表达检测 采用实时荧光定量PCR 法。……