何宝凤， 雷俊悦， 曾 奎， 陈雄英， 黄秋林

(南华大学附属第一医院胃肠外科，湖南省衡阳市 421001)

原发性肝癌是全球发病率第六位及癌症相关死亡率第四位的癌症[1]。Apelin在体内分布广泛，在右心房、左心室、脑、肺、肝和肾上腺中均可检测到Apelin的表达，尤其在血管内皮细胞中高表达[2]。Apelin可通过旁分泌的形式介导肿瘤新生血管的生成，Picault等[3]报道了Apelin信号通过激活自分泌参与结肠腺癌的生长。 Apelin家族包括多种亚型，焦谷氨酸修饰形式的Apelin-13是其中生物活性最强的一种。Apelin-13与部分肿瘤的生长侵袭转移密切相关[4-5]。Apelin在肝癌中表达上调，以自分泌的形式通过PI3K/Akt通路促进肝癌的进展[6]。本研究以不同浓度Apelin-13处理肝细胞癌HepG2细胞不同时间，观察其对HepG2细胞增殖的影响，以研究其在肝癌发展中的影响及作用机制。

1 材料和方法

1.1 材料

人肝癌细胞HepG2购自中科院上海细胞研究所；Aeplin-13购自Santa公司；抗-CyclinD1抗体、抗-Caspase-3抗体购自ABZOOM公司；MTT试剂盒购自康为世纪生物科技有限公司；十二烷基硫酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)凝胶试剂盒购自博士德生物科技有限公司。

1.2 细胞培养

人肝癌HepG2细胞37 ℃、5%CO2培养箱中培养，显微镜下观察到约90%细胞覆盖培养板后，用胰酶消化并吹打成悬液。接种于96孔板中，约5×103/孔。待细胞覆盖率约50%时，予细胞换液，加入不含10%FBS的培养基，放入培养箱继续培养12 h备用。

1.3 细胞分组

根据本课题组前期的研究[7]，按不同浓度的Aeplin-13分为5组：10%FBS(对照组)、0.000 1、0.001、0.01、0.1 μmol/L组，处理时间为24 h；每组设3个复孔。再根据初步的实验结果，选用差异最大的Apelin-13浓度(0.1 μmol/L)处理不同时间：0 h(对照组)、6、12、18、24 h组。……