刘录山， 邓懿铭， 李 清

(1.南华大学心血管疾病研究所 动脉硬化学湖南省重点实验室 湖南省动脉硬化性疾病国际科技合作与创新联合实验室，湖南省衡阳市 421001；2.湖南环境生物职业技术学院病理学教研室，湖南省衡阳市 421001)

缺血缺氧性脑损伤通常由脑组织出现急性或慢性的局部或完全缺氧所导致，临床上以新生儿窒息引起的脑损伤多见[1]，是引起神经系统损伤的主要原因，在此过程中神经细胞凋亡起着重要角色[2]。

缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor,HIF-1α)是一类真核细胞转录因子，在细胞处于低氧状态时其表达水平升高以应激性地对抗内环境改变[3-4]。研究表明前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)与神经细胞凋亡存在相关性[5]。本课题研究缺氧是否通过调节HIF-1α表达上调PCSK9水平引起神经细胞凋亡，旨在为缺血缺氧性损伤的防治提供潜在的治疗靶点。

1 材料和方法

1.1 试剂与仪器

PC12细胞购自中科院上海细胞库；氯化钴(CoCl2)购于美国西格玛公司；DMEM培养基购于美国Hyclone公司；ECL化学发光检测试剂盒购自湖南艾佳生物科技公司；胎牛血清购自天津市灏洋生物制品公司；Hoechst 33258染色剂购自江苏碧云天生物有限公司；PCSK9、HIF-1α、Caspase-3、Caspase-9、β-actin兔抗人多克隆抗体均购自Proteintech公司；Lip 2000转染试剂、台盼蓝染色液购自北京索莱宝公司；缺氧诱导因子抑制剂利非西呱(YC-1)、缺氧诱导因子激动剂二甲基乙二酰基甘氨酸(DMOG)购自美国Selleck公司；PCSK9小干扰RNA(PCSK9 small interfering RNA,PCSK9 siRNA)购自吉凯基因。倒置光学显微镜购自日本Olympus公司；倒置荧光显微镜购自日本尼康公司；化学发光成像系统购自上海天能公司；……