叶佩灵， 嘉红云， 彭 亮

1 广州医科大学附属第二医院 检验科， 广州 510260； 2 广州医科大学附属第五医院 检验科， 广州 510700

在我国，肝癌是仅次于肺癌的第二大恶性肿瘤，中国占全球发病人数的47%[1]。肝癌的发病原因尚未明确，以发展快、疗效差和复发率高为特征，极易发生肝内和肝外转移，预后差，5年生存率不足30%。近年来，大量研究发现高尔基体磷蛋白2/高尔基体蛋白73(golgi phosphoprotein 2，GOLPH2/GP73)的高表达与肝脏疾病有一定的关系[2-3]，尤其与原发性肝癌关系密切，人们逐渐认识到GP73有可能成为肝癌早期诊断的标志物[4-5]，血清GP73可预测肝细胞癌患者肝切除术后的预后[6]。研究[7]还发现，有效干扰GP73基因表达后，可明显抑制人肝癌细胞的迁移和侵袭能力，GP73的表达可能与肿瘤的发生发展相关。目前关于GP73通过何种信号通路参与肝癌的发生发展的研究较少，为进一步阐明GP73对肝癌的作用机制，本实验建立了干扰和过表达GP73的Hep3B肝癌细胞模型，采用转录组测序检测不同GP73表达量的肝癌细胞中mRNA表达谱的差异，并进行生物信息学分析，旨在筛选出GP73参与调控肝癌相关的信号通路，进而为肝癌发病机制的探索提供新的思路。

1 材料与方法

1.1 试剂和仪器 Hep3B细胞株购于广州赛库生物技术有限公司；GP73、GAPDH一抗购于Proteintech公司；PI3K、p-AKT和AKT抗体购于CST公司；pcDNA3.1过表达质粒、阴性对照质粒由安徽通用生物科技有限公司提供；干扰片段引物设计、合成和测序由吉玛生物公司完成；文库构建试剂盒(NGS00-2013，中国依科赛)；Trizol(TR118-500，MRC)；qRT-PCR试剂盒(Q341-03，Vazyme)，GP73、内参GAPDH引物、实时定量PCR引物由捷瑞生物公司合成。……