赵长铭，黄 萌，王振宁，徐璐璐

1解放军总医院研究生院，北京 100853；2 解放军总医院第一医学中心 口腔正畸科，北京 100853

骨代谢过程中，许多小分子蛋白或RNA 通过对有分化潜能的干细胞发挥调控作用，进而影响骨骼发育和重塑。越来越多的实验研究表明microRNAs 参与调控干细胞增殖、成骨分化过程，并发挥重要调控作用[1-4]。最近一项研究显示，进行体育锻炼后人血清中microRNAs(miR-129-5p、miR-21-5p 和miR-378-5p)表达增加[5]。用锻炼后的血清培养人骨髓间充质干细胞，发现对成骨分化有抑制作用的PTEN 和SMAD7 蛋白表达下调，相关成骨分化基因表达上调。我们前期的实验发现，在小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化7 d、14 d 后的miR-129-5p 表达水平均显著上调(P＜0.05)。Liu 等[6]报道miR-129-5p 通过调控BMP2 基因促进肝癌的增殖和转移。而人滑膜间充质干细胞来源的miR-129-5p 通过靶向hMGB1 减轻IL-1 诱导的骨关节炎[7]。对miR-129-5p 研究主要集中在肿瘤增殖、转移及免疫调控方面，其在成骨分化和骨形成过程中的作用和机制尚不清楚。因此，本研究探究miR-129-5p 对MC3T3-E1 细胞成骨分化的影响，通过Targetscan 软件预测并筛选出miR-129-5p 的潜在靶基因，并进一步研究其作用靶点及具体调控机制，为骨发育和骨重塑提供理论支持。

材料和方法

1细胞和试剂 α-MEM 培养基(Gibco，美国)；特级胎牛血清(Gibco，美国)；磷酸盐缓冲液PBS(Gibco，美国)；青链霉素混合液(Gibco，美国)；0.25% 胰蛋白酶(Gibco，美国)；MC3T3-E1 细胞(购自中国科学院上海生科院细胞资源中心；RIPA 裂解液(索莱宝，北京)；小鼠成骨分化诱导液、茜素红染色液(赛业生物，北京)；cDNA逆转录试剂盒(Thermo，美国)；qRT-PCR 试剂盒(Roche，瑞士)；慢病毒miR-129-5p mimic、inhibitor、control 和慢病毒助转剂HitransG A 25x(吉 凯，北 京)；……