王佳慧，汪 磊，彭 岳，原鲜玲，赵铁建，郑 洋

(广西中医药大学 1.赛恩斯新医药学院医学系，2.基础医学院 生理教研室，广西 南宁 530222)

肝纤维化(hepatic fibrosis，HF)是肝脏对于各种慢性刺激的损伤修复反应，主要以肝星状细胞 (hepatic stellate cells，HSC)受到外界刺激被活化从而产生大量细胞外基质(extracellular matrix，ECM)沉积为主要特点，HF是慢性肝病进程中的关键阶段，进一步发展会导致肝硬化，甚至肝癌，有研究表明恰当有效的治疗措施可以逆转HF[1-3]。

微小RNAs(microRNA，miRNA)属于非编码小核糖核酸中的一类，主要通过与mRNA的3'非翻译区(3'UTR)的结合调控mRNA的表达，从而调控蛋白质的合成，导致其可以参与细胞增殖和分化、细胞死亡、代谢和信号转导等生物过程的调节[4-5]。在HF方面，目前研究认为miRNA主要通过影响HSC的增殖及活化、ECM的产生及降解、信号转导等多个方面参与HF发生、发展过程。如miR-150和miR-194的过表达可抑制LX2细胞增殖、下调CollagenI和α-SMA表达[6]；miR-125b在多种肝病中表达失调，在非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)小鼠模型中，miR-125b通过调控RhoA通路，从而导致HF的发生[7]。miR-125b与HF关系密切，但其具体的调控机制尚不明确，故本次研究使用细胞转染方法，希冀阐明miR-125b对HSC表型的影响，为HF的防治以及药物的研发提供新的标靶。

1 材料

1.1 仪器低速离心机(广州吉迪仪器有限公司，JIDI-20D)、水平摇床(上海达姆实业有限公司，T200)、酶标仪(北京普朗新技术有限公司，mullSKANMK3)、倒置显微镜(OLYMPUS，IX51)、流式细胞仪(BECKMAN，CytoFLEX)、RT-PCR仪(ABI，QuantStudio 6)。

1.2 细胞株大鼠肝星状细胞(HSC-T6)Procell 货号:CL-2317。

1.3 试剂MTT(BIOSHARP，0793)、 CollagenⅠ(220KD)(Abcam，ab260043)、CollagenⅢ(138KD)(abcam，ab34710)、β-actin(42KD)(Servicebio, GB12001)细胞凋亡检测试剂盒(南京凯基生物，KGA1026)、 Lip2000(赛墨飞，12566014)、miR-125b相关片段(上海吉玛制药技术有限公司)。

2 方法

2.1 细胞培养将HSC-T6进行复苏后接种于无菌培养瓶中，加入含10% FBS和1%高糖DMEM培养液，将其置于37 ℃、5% CO2的培养箱中培养，选用生长旺盛的对数期细胞进行实验。……