陈烨 孙守栋 周芳美 杨雪静

肺炎克雷伯菌属于革兰阴性条件性致病菌，可引起肺炎、神经系统感染、肝脓肿、皮肤软组织感染、泌尿系感染及败血症等多种临床感染［1］。碳青霉烯类抗生素是治疗产超广谱β-内酰胺酶肠杆菌科感染的首选药物［2］，但随着该类抗生素的广泛使用，耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）逐渐在各个国家及地区流行［3-4］，成为临床治疗的难点。如同时携带毒力因子，则对临床治疗构成严重威胁［5］。肺炎克雷伯菌毒力因子主要分为脂多糖、荚膜、铁摄取系统相关因子、外膜孔蛋白、尿囊素代谢相关基因等［5］，其中荚膜是重要的毒力因素，可促进菌株的黏附、抗吞噬、抗血清杀菌和远处定植［6］。为进一步明确本地区CRKP菌株耐药特点及其携带毒力因子的情况，作者对临床分离的CRKP菌株进行耐药表型及毒力因子检测。

1 材料与方法

1.1 菌株来源 收集2019年8月至2020年1月浙江中医药大学附属第一医院分离的CRKP菌株43株，剔除同一患者重复菌株。质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922。

1.2 主要试剂及仪器 细菌核酸提取盒、10×Ace Taq PCR Buffer（含Mg2+）、dNTP mix、Ace Taq与DNA Marker购自天根生化科技（北京）有限公司；质谱仪（Bruker）、Vitek-2 Compact 全自动微生物分析系统（法国生物梅里埃公司）、PCR 仪（美国 Bio-Rad 公司）、电泳仪及紫外凝胶成像仪（上海天能科技有限公司）；扩增引物合成及PCR产物测序由北京擎科新业生物技术有限公司完成。

1.3 菌株鉴定 挑取血平板上24 h培养的菌落，涂布细菌于靶板，经MALDI-TOF质谱仪鉴定确认，鉴定率需达到2.0以上。

1.4 药敏试验 采用Vitek-2 Compact微生物分析系统进行药敏试验，琼脂稀释法确认碳青霉烯类药物敏感性，药敏结果采用美国临床和实验室标准化协会（CLIS）推荐标准进行判断。……