杨超， 刘贝，魏微，胡芬， 姚洋，孙志华

(湖北文理学院附属医院， 襄阳市中心医院 肿瘤科，襄阳 441000)

肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophage，TAM)是指浸润于肿瘤间质中的巨噬细胞(macrophage, M)[1]。TAM长期在肿瘤微环境下会逐渐形成独特的表型，同时在功能上也会发生明显改变。根据活化状态和功能，TAM可以分为M1和M2型[2-3]。研究发现，在人类常见的多种肿瘤中，TAM随肿瘤发展而逐渐以M2型为主，M2型巨噬细胞(M2 macrophage，M2-M)更有助于肿瘤的生长、侵袭和转移[4-6]。因此，有效调控肿瘤微环境中的TAM表型有望成为肿瘤治疗的方向之一。肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor，HGF)是M2-TAM在肿瘤微环境中分泌的一种重要的细胞因子[7]。为了解在非小细胞肺癌中HGF以及M2-TAM的作用，本研究探讨了HGF及其上游靶基因miR-142-5p在以M2-TAM为主的非小细胞肺癌中的功能，同时验证M2-TAM对非小细胞肺癌的促生长和转移作用。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂小鼠RAW264.7巨噬细胞和小鼠肺癌Lewis细胞由襄阳市中心医院医学实验中心保存，10% FBS、青霉素和链霉素购自Invitrogen公司，RPMI 1640和DMEM培养液购自Life Technologies公司，Transwell小室、培养板购自Corning公司，TRIzol RNA提取试剂盒、Thermo反转录试剂盒购自Thermo Fisher Scientific公司，RNA纯化试剂盒和RT-PCR试剂盒购自QIAGEN公司，ELISA试剂盒购自联科生物公司，CCK-8、PBS和RIPA裂解缓冲液购自Beyotime Biotechnology公司，ELISA检测仪购自Thermo公司，IL-4购自Sigma公司，Matrigel购自Bio-Rad公司，荧光素酶活性检测试剂盒以及HGF-Wt和HGF-Mut质粒购自Promega 公司，si-HGF (EMU037921-20UG)购自Sigma-Aldrich公司。抗鼠CD206-PE抗体和CD163-FITC抗体购自BD Pharmingen公司。FACSCallibur流式细胞仪购自BD公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞共培养 将1×105个/mL的小鼠M和肺癌Lewis细胞均分别接种到含10%灭活FBS的完全RPMI 1640培养液中，在37 ℃、 5%CO2完全饱和湿度条件下常规培养，每2～3 d传代1次，取处于对数生长期的细胞进行试验。……