方均燕，宋阿会，刘英莉

(上海交通大学医学院附属第九人民医院 肾内科，上海 200011)

脓毒症为机体对感染反应失调的临床综合征，临床上缺乏有效的治疗方法[1-2]。研究发现，瀑布式炎症级联反应是脓毒症发展的重要环节[3]。作为机体反应的第1道防线，巨噬细胞可极化为促炎型(M1型)或免疫调节型(M2型)[4]。研究发现，通过抑制巨噬细胞M1型极化，能够提高脓毒症小鼠的生存率[5]。因此，调控巨噬细胞极化有望成为脓毒症治疗的新方向。大电导钙依赖性钾通道(large-conductance calcium-activated potassium channel，BKca)分布于多种类型细胞膜上[6]。研究发现，BKca不仅能够维持钾离子平衡，而且参与调节多种炎症反应的发生、发展[7-8]，有望成为炎症治疗的靶点。本研究以BKca为研究对象，探讨其对巨噬细胞的增殖、M2/M1亚型极化及细胞因子分泌水平的影响，以期为脓毒症的免疫治疗提供新靶点。

1 材料与方法

1.1 试剂与耗材人单核细胞系THP-1 (中国科学院细胞库)，RPMI 1640培养液(Hyclone公司)，FBS(Bioind公司)，青霉素、链霉素、0.25%胰蛋白酶(Gibco公司)，CCK-8(上海睿安生物科技有限公司)，FITC标记的人CD80抗体(FITC-CD80)、别藻蓝蛋白(allophycocyanin，APC)标记的人CD206抗体(APC-CD206)试剂盒(BioLegend公司)，PBS溶液(Hyclone公司)，Hank＇s溶液(Gibco公司)，蕈青霉素(Alomone公司)，佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate，PMA；Sigma公司)，电转液、电泳液[生工生物工程(上海)股份有限公司]，BKcα抗体(Alomone公司)，GAPDH抗体(Proteintech公司)，RIPA(碧云天有限公司)，蛋白磷酸酶抑制剂混合物(索莱宝公司)，RT reagent Kit(TaKaRa公司)。其他生化试剂均为国产分析纯。所用引物由生工生物工程(上海)股份有限公司设计、合成(表1)。

表1 引物序列

1.2 方法

1.2.1 THP-1 细胞的预处理 将THP-1细胞加入含10% FBS及1%双抗的RPMI 1640培养液中，放入37 °C、5%CO2培养箱培养48 h。……