华盛平，王 瑶，郑润琪，李金亮，张维娜，夏 晴

（国家生物医学分析中心，北京 100850）

巨噬细胞作为一种在固有免疫应答和适应性免疫启动中发挥重要作用的免疫细胞，在保护机体免受感染方面发挥着关键作用。巨噬细胞免疫学功能主要包括吞噬（病原体、病毒感染细胞、细胞碎片和死细胞等）、抗原递呈和细胞因子分泌［1-2］。钙离子是细胞内重要的第二信使，在细胞周期、运动、自噬和凋亡等生物学事件中发挥重要调节作用［3］。细胞中钙离子主要存在于细胞浆、线粒体和内质网中，对线粒体发挥功能至关重要［4］。钙离子促进线粒体内ATP的产生，当线粒体内钙离子浓度过载时会导致细胞死亡［5］。近年来，钙离子信号在免疫细胞生物学功能中的作用受到关注，发现钙离子信号在T细胞分泌集落刺激因子以及肥大细胞脱颗粒过程中均发挥了重要作用［6-7］。相对于T细胞和肥大细胞，有关巨噬细胞钙离子信号的研究较少，特别是关于线粒体钙离子信号在巨噬细胞中的作用和调控机制尚未见报道。

4mt-GCaMP6线粒体钙离子荧光探针是在GCaMP6探针基础上加入线粒体靶向定位序列，通过绿色荧光强度可特征性地指示线粒体内钙离子浓度的变化［8］。本研究使用4mt-GCaMP6制备慢病毒并感染永生化小鼠骨髓来源的巨噬细胞（immortalized bone marrow-derived macrophages，iBMDM），构建稳定表达线粒体钙离子荧光探针的巨噬细胞系iBMDM-4mt-GCaMP6，为探究线粒体钙信号在巨噬细胞生物学功能中的作用及相关分子机制提供工具。

1 材料与方法

1.1 细胞和主要试剂

iBMDM巨噬细胞和293T细胞取自本实验室细胞库。……