高钦玥 宋 廉 吴琪炜 魏士杰 刘 赛 龚爱华 朱海涛 王冬青

1.江苏大学附属医院影像科，江苏镇江 212000；2.江苏大学医学院，江苏镇江 212000

铁死亡，2012 年新定义的一种细胞程序性死亡[1]，由铁依赖性的磷脂过氧化物堆积引起[2-3]。正常生理条件下，谷胱甘肽过氧化物酶4（glutathione peroxidase 4，GPX4）以还原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）为底物将细胞毒性的过氧化脂质转化为无毒的脂醇[4]，当小分子化合物Erastin 作用谷氨酸/胱氨酸转运体（XC-系统）时[5-6]，抑制胱氨酸转入导致还原型GSH 合成降低并引起GPX4 活性下降[7-8]，最终胞内脂质过氧化物不能被及时清除发生铁死亡[9]。胰腺导管腺癌（pancreatic ductal adeno carcinoma，PDAC）已被证实依赖半胱氨酸代谢预防活性氧（reactive oxygen species，ROS）过多诱发的铁死亡，抑制XC-系统药物可能成为临床PDAC 治疗的重要手段[10-11]。但低氧是PDAC 药物治疗抵抗原因之一[12-13]，低氧是否引起PDAC 中的Erastin 的耐药及其具体机制仍需验证。本研究将Erastin 用于低氧培养的PDAC 细胞中检测铁死亡指标变化，并探讨低氧通过调控去乙酰酶Sirtuin3（SIRT3）影响铁死亡的机制。

1 材料与方法

1.1 细胞、试剂和仪器

人PDAC 细胞株PANC1，鼠PDAC 细胞panc02（中国科学院上海细胞研究所）；DMEM 高糖培养基（SH30243.01），PBS（SH30256.01）购于美国Hyclone 公司；澳洲胎牛血清（10099141）购于美国Gibco 公司；铁死亡挽救剂Ferrostatin-1（HY-100579），坏死挽救剂Necrostatin-1（HY-15760），凋亡挽救剂Z-VAD-FMK（HY-16658B），SIRT3 抑制剂3-TYP（HY-108331），Erastin（HY-15763）购于美国Med Chem Express 公司；引物合成于上海生工公司；6 孔细胞培养板（3516）、96 孔细胞培养板（3599）购于美国Corning 公司；CCK-8试剂盒（CK04）购于日本同仁化学；BCA 蛋白检测试剂盒（23227）购于Thermo Fisher Scientific 公司。多功能酶标仪800 TS 购于美国Bio Tek 公司；倒置荧光显微镜Axio Observer A1 购于蔡司公司；RT-qPCR 仪CFX96 购于美国Bio-Rad 公司；台式离心机购于Thermo Fisher Scientific 公司。

1.2 研究方法

1.2.1 细胞培养 PANC1、panc02 用含10%胎牛血清的高糖DMEM 培养，常规传代，置于37℃、5%CO2细胞培养箱。……