谷 宇 尧永华 陆殿宇

急性肾损伤(Acute kidney injury, AKI)是一种常见的临床并发症，以肾小球滤过率突然下降为主要特征。近年来尽管肾脏替代疗法等支持治疗取得了较大进步，AKI 发生5年后死亡率仍高达50%[1]。肾缺血再灌注损伤(Renal ischemia reperfusion injury, RIRI)是引发AKI的主要原因，可见于许多临床情况下，如肾移植、部分肾切除、心脏手术、败血症等[2]。既往多项研究指出，RIRI过程中肾小管上皮细胞主要发生凋亡和坏死，然而采取相应的干预性治疗措施并不能有效降低患者的发病率及死亡率[3]。因此，深入探讨RIRI的致病机制，寻找有效的防治方法仍是临床亟待解决的难题。

新近研究发现DNA损伤参与多种疾病的细胞损伤和死亡过程，尤其在缺血再灌注损伤(Ischemia reperfusion injury, IRI)相关的细胞死亡中起重要作用[4-5]。轻度细胞DNA损伤可以通过活化多聚ADP 核糖聚合酶-1(PolyADP-ribose polymerase-1, PARP-1)完全修复；较严重DNA损伤会引发细胞凋亡；而广泛严重的DNA损伤会引发一种独特的细胞死亡形式——PARP-1依赖性细胞死亡(Parthanatos)。最近有研究提示Parthanatos可能是IRI细胞死亡的重要形式。本研究旨在探讨Parthanatos与RIRI病理过程之间的关系，为进一步寻找有效药物干预Parthanatos死亡并防治AKI打下基础。

1 材料与方法

1.1 材料

正常人肾小管上皮细胞HK-2(中国典型培养物保藏中心)；胎牛血清，胰蛋白酶(Gibco)；右美托咪定(Dexmedetomidine, Dex, 江苏恒瑞)；CCK-8检测试剂盒(Dojindo)；LDH试剂盒(Roche)；活性氧(reactive oxygen species, ROS)检测试剂(Sigma-Aldrich)；Trizol试剂(Invitrogen)；ReverTra Ace qPCR RT Master Mix和SYBR® Green Realtime PCR Master Mix(TOYOBO)。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养及H/R处理 我们采用人肾小管上皮细胞缺氧/复氧(Hypoxia/Reoxygenation, H/R)模型模拟RIRI。细胞培养箱(温度37 ℃, 湿度90%, 95%空气+5%CO2)内细胞培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中。HK-2细胞培养至融合约……