韦喜梅，廖安翠，陈 霞，黎剑威，黄玉淑，何凤愿，韦建华，谢 婷

（1.河池市动物疫病预防控制中心，广西河池 547000；2.河池市水产畜牧科教站，广西河池 547000）

片形吸虫病是一种重要的但容易被忽视的人兽共患寄生虫病，是目前影响经济较严重的家畜寄生虫病之一[1]。该病能引起急性或慢性肝炎和胆管炎，并伴发全身性中毒和营养障碍，危害相当严重，可以引起幼畜和绵羊大批死亡[2]。河池市是广西壮族自治区肉羊养殖大市，2018 年、2019 年全市肉羊饲养量分别为140 多万只和160 多万只，位居全区第一。为了解河池市山羊片形吸虫的感染和流行情况，2018—2019 年连续2 年从河池市11 个县（区）采集山羊血清，采用间接ELISA 检测方法进行片形吸虫流行情况调查，以期为全市制定科学的山羊寄生虫病防控措施提供参考。

1 材料与方法

1.1 目标群

根据往年统计数据，河池市60%以上的山羊养殖场存栏在30～200 只范围内，因此本次调查将河池市辖区内年存栏30 只以上的山羊养殖场作为目标群。

1.2 抽样策略

在完成春季重大动物疫病集中免疫（3—5 月）的基础上，遵循流行病学调查抽样原则，采用先抽群体再抽个体的策略，按照预期流行率30%、置信水平95%、可接受误差5%进行抽样。结合各县（区）实际，随机抽取存栏30 只以上的山羊养殖场1 085 个。对场群，按照存栏量的多少，采用系统抽样法；存栏30～99 只的养殖场抽取5 份样品，100～199 只的抽取10 份，200～499 只的抽取15 份，500 只以上的抽取20 份。

1.3 样品采集

采集目标群内的成年羊常规全血样品，每份5 mL。2018—2019 年，共采集7 632 份全血样品，自然析出血清后于-20 ℃保存备用。

1.4 主要试剂

大片形吸虫分泌排泄抗原（ES 抗原）、标准阴阳性对照血清，均由广西大学动物科学技术学院寄生虫学教研室提供；兔抗山羊-lgG 酶标二抗，购自SeraCare Life Sciences 公司；ELISA 包被液、TMB 单组分显色液、吐温-20、PBS 磷酸盐缓冲液、明胶，均购自北京索莱宝科技有限公司。

1.5 间接ELISA 检测

参照Chauvin 等[3]的方法进行血清检测。用0.05 mol/L pH9.6 的碳酸盐缓冲液，将ES 抗原稀释至2.5 μg/mL，以100 μL/孔加入酶标板，37 ℃包被2.5 h，4 ℃过夜；PBST 洗板后加入明胶封闭液，150 μL/孔，37 ℃恒温箱孵育2 h；PBST 洗板后加入1:400 稀释的待检血清、阴阳性对照血清各2孔，100 μL/孔，37 ℃孵育1 h；PBST 洗板后加入1:8 000 稀释的兔抗山羊-lgG 酶标二抗100 μL/孔，37 ℃孵育1 h；PBST 洗板后加入TMB 显色液，显色10 min 后加终止液终止反应，读取OD450值，计算血清样品抗体阳性率。

结果判定：抗体百分度=（待检血清OD450平均值-标准阴性血清OD450平均值）÷（标准阳性血清OD450平均值-标准阴性血清OD450平均值）×100%。抗体百分度小于10%为阴性，10%～30%为可疑，大于30%为阳性。

2 结果

2.1 全市抽检情况

2018 年，全市共抽检103 个乡镇，抽检率为74.64%，其中天峨县、巴马县、大化县抽检覆盖了所有乡镇，抽检率为100%；2019 年，全市共抽检86 个乡镇，抽检率为62.32%，其中东兰县抽检率为100%。详见表1。

表1 2018—2019 年全市抽检情况统计

2.2 全市感染情况

2018—2019 年，共对河池市11 个县（区）1 085 个山羊养殖场的7 632 份血清进行了检测。从血清样品检测情况看，2018 年样品总体阳性率为44.34%，其中金城江区最高，为66.00%，宜州区最低，为35.08%；2019 年样品总体阳性率为49.81%，其中金城江区最高，为60.67%，巴马县最低，为21.43%。从养殖场检测情况看，2018 年场总体阳性率为79.72%，其中金城江区、罗城县均为100%；2019 年场总体阳性率为93.33%，其中金城江区、罗城县、南丹县、天峨县、都安县均为100%。详见表2。

表2 2018—2019 年山羊感染情况统计

2.3 重复抽检情况

2018—2019 年，共对39 个山羊养殖场进行重复抽检。2018 年检测血清209 份，样品总体阳性率为44.02%；2019 年检测血清394 份，总体阳性率为50.51%。详见表3。

表3 2018-2019 年相同养殖场感染情况统计

3 讨论

大量研究显示，广西牛群中的片形吸虫感染情况非常普遍。霍孔林等[4]报道，广西牛群片形吸虫平均感染率达69.3%，其中河池市牛感染率为69.1%；王冬英等[5]报道，广西水牛片形吸虫感染率为60%～80%，黄牛为60%左右；陈芳玲等[6]报道，百色市牛片形吸虫整体阳性率为92.5%；王孝德等[7]报道，贺州市牛片形吸虫阳性率为86.75%～89.87%。但是，有关羊片形吸虫感染情况却鲜有报道。本调查采用间接ELISA 检测方法，对河池市11 个县（区）山羊片形吸虫感染和流行情况进行调查，发现2018 年、2019 年的血清抗体总体阳性率分别为44.34%、49.81%，场总体阳性率分别为79.72%、93.33%，说明河池市山羊片形吸虫感染也很普遍。

河池市具有典型的喀斯特地貌，山地、丘陵多，所以绝大部分山羊养殖均为半圈养和全放养模式。此外，金城江、宜州、罗城、环江、东兰、巴马、都安7 个县（区）均为山丘水网型的血吸虫老疫区，特有的生态环境使得淡水螺分布广泛，放牧的山羊更容易通过接触囊蚴而受感染，这应是造成这些地区片形吸虫高阳性率的原因之一。

本次调查对39 个山羊养殖场进行了重复抽检，虽然复检比例较少，但是从调查结果来看，两年内这些养殖场的片形吸虫血清抗体阳性率均维持在一个较高的水平，且有略有加重趋势，说明养殖户对于驱除山羊片形吸虫的意识较薄弱。有些养殖户对于驱虫药的使用仅仅局限于伊维菌素或阿维菌素，驱虫缺少针对性，这也应是造成该地片形吸虫高阳性率的原因之一。

金城江、巴马、都安3 个县（区）2019 年的总体样品阳性率分别比2018 年减少了18.67%、21.01%和16.66%，这可能与部分养殖户开始注重驱虫有关。但是，金城江、都安2019 年场阳性率仍均为100%，这应当是驱虫不彻底的一种提示。

综上，河池市山羊片形吸虫感染很普遍，感染程度较严重，因此应加强宣传，提高养殖户的驱虫意识，并根据实际情况制定有效的防治措施。