樊晓旭，张皓博，刘蒙达，迟庆安，2，亓 菲，3，刘婷婷，孙淑芳，范伟兴

（1.中国动物卫生与流行病学中心，国家动物结核病参考实验室，山东青岛 266032；2.海南省动物疫病预防控制中心，海南海口 571100；3.青岛农业大学动物医学院，山东青岛 266109）

传统ELISA方法的基本原理是将抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。将抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留了免疫活性，又保留了酶的活性。当受检物质与酶标抗原或抗体发生特异性结合后，加入酶反应底物，催化显色，根据颜色反应的深浅或有无，定性或定量分析受检物质。由于酶的催化效率很高，故可放大反应效果，提高检测的敏感度[1]。但是，传统ELISA方法由于受读取方式限制，灵敏度仅达到皮摩尔（即pg/mL）水平，且需要将受检物质进行稀释以达到反应所需的体积。

1971年，Engvall和Perlmann报道了利用ELISA定量测定IgG的研究技术，使其成为测定液体样本中微量物质的方法。2014年，基于ELISA原理，美国Quanterix公司开发了单分子免疫阵列（single molecule array，Simoa）技术，用磁珠捕获免疫复合物，并单独封闭在Simoa圆盘的微孔中，遵循泊松分布进行分析，实现数字化形式的ELISA检测，又称“数字ELISA”[2]。

相比传统ELISA，Simoa技术具有6点优势：（1）灵敏度高。其灵敏度为传统ELISA技术的1 000倍以上，检测下限达到fg/mL，实现了超低丰度蛋白的有效检测和定量，节约珍贵样本，减少基质效应。（2）全自动化。基于Quanterix Simoa HD-1数字式单分子免疫阵列分析仪，试验过程不依赖操作人员，从而保证结果的重复性和精准性。……