李 乔，吴 健，陈泽城

（高州市人民医院检验科，广东 高州 525200）

防治结核病是全球面临的公共卫生问题。大量的研究表明，尽早地对结核病患者的病情进行诊治是控制其病情发展的关键[1-3]。目前，临床上常采用直接涂片染色法、改良罗氏培养法、MGIT-960 培养法等对结核病患者的病情进行诊断。本文主要是探讨用Real-time PCR 扩增技术联合浓缩涂片染色法快速诊断结核病的效果。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本文的研究对象是2016 年6 月至2020 年6 月期间高州市人民医院检验科收到的526 份分泌物标本。在这526份分泌物标本中，痰液标本有427 份，支气管冲洗液标本有37 份，尿液标本有25 份，胸腹液标本有25 份，脓液标本有5 份，脑脊液标本有2 份，心包液标本有2 份，组织标本有2 份，精液标本有1 份。

1.2 方法

采用直接涂片染色法进行病原体检测的方法是：按照《痰涂片镜检质量保证手册》的要求，将分泌物标本均匀地涂抹在载玻片上，并进行抗酸染色操作[4]。染色完毕后，将载玻片放置于显微镜下进行检查。采用Real-time PCR 扩增技术联合浓缩涂片染色法进行病原体检测的方法是：将5 ～10 mL 的分泌物标本放置在50 mL 离心管中。按照《结核病细菌学检验规程》及BACTEC MAGIT-960 操作规程进行碱消化浓缩操作[5]。在沉渣中加入0.7 ～1 mL 的PBS缓冲液（pH=6.8），制成混合液。对该混合液进行离心处理，制成离心沉渣悬浮液。将0.1 mL 的离心沉渣悬浮液加入到DNA 提取管中，将0.5 mL 的离心沉渣悬浮液加入到BACTEC MGIT-960 培养管中，取0.1 mL 离心沉渣悬浮液制成规格为10 mm×10 mm 的载玻片，然后，按照结核分歧杆菌核酸扩增荧光检测试剂说明书的要求，将DNA 提取管、BACTEC MGIT-960 培养管及载玻片分别放置在达安760 实时荧光定量PCR 仪（生产企业为中山大学达安公司）中。……