李青雯，刘守刚，林静霞，陈永锋

1.南方医科大学，广东 广州 510515；2.南方医科大学皮肤病医院，广东 广州 510091

银屑病是一种慢性炎症性皮肤疾病，其主要特征是角质形成细胞的异常增殖和炎症介质(包括促炎细胞因子)的产生［1-2］。近年来，青黛膏作为临床治疗银屑病的常用方剂，对银屑病具有显著疗效［3-4］，其治疗银屑病的作用得到了越来越多的关注，但治疗机制却不完全清楚。为探究青黛膏治疗银屑病的机制，本研究采用青黛膏的主要成分靛玉红刺激HaCaT细胞，了解其对促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达的影响，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 细胞来源与试剂

人类永生化角质形成细胞株HaCaT细胞(上海冉再生物科技有限公司)。靛玉红(北京索莱宝科技有限公司)，Human IL-1βELISA Kit(Raybiotech，广州)，Human IL-6 ELISA Kit(Raybiotech，广州)，Human TNF-αELISA Kit(Raybiotech，广州)，DMEM(美国Thermo Scientific公司)，胎牛血清(美国Thermo Scientific公司)，胰酶(美国Thermo Scientific公司)，上下游引物(上海生工)，PrimeScript® RT reagent Kit with gDNA Eraser(Takara，日本)，TB Green® Premix Ex Taq®(Tli RNaseH Plus)，Bulk(Takara，日本)。

1.2 主要仪器

NanoDrop One分光光度计(美国Thermo Scientific公司)，ABI ProFlex PCR系统梯度基因扩增仪(上海旦鼎国际贸易有限公司)，CFX Connect实时荧光定量PCR仪(美国Bio-Rad公司)，酶标仪(美国Bio-Rad公司)，二氧化碳培养箱(Thermo Electron Corpo-Ration，Steri-cycle CO2Incubator)。

1.3 实验方法

1.3.1 HaCaT细胞复苏培养、铺板复苏HaCaT细胞，完全培养基(90% DMEM+10% FBS)培养细胞，在37℃、5%CO2条件的二氧化碳培养箱中孵育培养，在倒置显微镜下观察细胞生长状态，弃除旧培养基后用PBS洗涤细胞，加入3 mL胰蛋白酶消化细胞，放入37℃培养箱中孵育6 min，待细胞分离后加入3倍胰酶体积(约9 mL)含血清的新鲜培养基终止消化，转移至15 mL离心管中，以1 000 rpm/min的速度离心5 min，弃上清后加入新鲜培养基重悬细胞，进行细胞计数后将细胞稀释至2×105个/mL，准备好2块6孔板，每孔加入1 mL重悬的细胞悬液均匀铺板，放入二氧化碳培养箱中培养。……