王姝涵 隋爱华 韩亚斐 周泉 许行 姚如永

(青岛大学附属医院医学研究中心，山东 青岛 266003)

巴戟天(MorindaofficinalisHow)为茜草科巴戟天属药用植物，主产于广东、广西等地[1]。其干燥根作为四大南药之一，在传统中医药中具有补肾阳、强筋骨、祛风湿等功效[2]。巴戟天的活性成分主要为环烯醚萜苷、蒽醌和糖类等[3-5]，具有抗不孕不育、抗抑郁和抗骨质疏松等作用[6-9]。常与巴戟天混淆的药材羊角藤、铁箍散、虎刺等在外部形态上与巴戟天极为相似，但药用价值和有效成分差异很大，选择不当将引起不良反应，影响临床用药安全[10]。根据药典标准，巴戟天的鉴定方式为显微鉴别、色谱分析等[11]，但这些鉴定方式存在灵敏度不够、耗时较长、设备昂贵等弊端[12-13]，因此临床迫切需要一种灵敏、快速、成本较低的巴戟天鉴定技术。环介导等温扩增(LAMP)技术是一种较为新颖的核酸扩增技术，由NOTOMI等[14]于2000年建立。在特异性引物、链置换型DNA聚合酶的作用下，靶基因于恒温条件15～60 min即可完成扩增反应[15]。加入荧光染料可通过明显的颜色变化客观判定检测结果[16]，通过实时浊度仪或实时荧光定量仪可对反应过程进行实时定量监测[17]。目前LAMP检测已广泛应用于临床诊断、病原体检测、病虫害排查等[18-20]，但尚未见巴戟天LAMP检测相关的研究报道[21]。DNA条形码是一种常用的分子鉴定工具，广泛应用于植物鉴定[22-23]。巴戟天二级内部转录空间(ITS2)序列是该物种最具特异性的标记序列之一，具有高度种间变异性和区分度[24-25]。本研究拟建立一种基于LAMP技术针对巴戟天ITS2序列的简便、快速、价廉检测方法，为巴戟天DNA分子鉴定提供新方式。……