杜新莹，王洪梅，何洪彬

(1. 山东师范大学 生命科学学院，山东 济南 250014；2. 山东师范大学 反刍动物疾病研究中心， 山东 济南 250014)

Wnt通路是调控细胞增殖分化、胚胎发育、组织稳态及细胞癌变等生物过程的高度保守的信号通路[1-3]，主要分为依赖β-连环蛋白(β-catenin,β-CAT)的经典Wnt通路、平面细胞极性非经典Wnt通路以及Wnt-Ca+非经典Wnt通路[4]。在经典Wnt通路中，腺瘤样蛋白( colorectal adenoma-like protein，APC)、轴相关蛋白( axin-related protein，Axin)、周期蛋白依赖性激酶抑制因子1(casein kinase 1,CK1)和G-联蛋白糖原合成酶激酶3β( glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β)组成的降解复合体对于该信号通路的调控发挥关键作用[5]。当Wnt通路未激活时，β-连环蛋白降解复合体处于稳定状态，CK1和GSK-3β先后磷酸化β-连环蛋白特定位点，磷酸化的β-连环蛋白被泛素连接酶识别，随后通过蛋白酶体降解。因此，细胞质内β-连环蛋白的蛋白浓度维持在较低水平。当Wnt通路激活时，β-连环蛋白降解复合体解聚，细胞质内的β-连环蛋白不断积累，并进入细胞核与TCF/LEF结合，启动c-myc、cyclin等下游基因的转录表达[2，6-8]。

据报道，β-连环蛋白影响人类免疫缺陷病毒、类猪圆环病毒、人类巨细胞病毒、丙型肝炎病毒等多种病毒的增殖和复制[9-11]，而β-连环蛋白对牛病毒复制影响的研究较少。因此，本试验通过构建牛β-连环蛋白RNA干扰载体，筛选出有效沉默牛β-连环蛋白的shRNA载体，并建立沉默牛β-连环蛋白的MDBK细胞系，为从基因沉默水平开展β-连环蛋白功能研究及其对牛病毒复制影响的机制研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 细胞和载体

293T细胞、MDBK细胞、大肠杆菌DH5α均由本实验室保存；β-连环蛋白过表达重组载体pLVX-IRES-Flag-β-catenin由本实验室构建和保存；……