朱 真，杜吉革，薛 麒，李启红，印春生，张莹辉，李倩琳，姚文生，陈小云

(中国兽医药品监察所，北京 100081)

产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)旧称魏氏梭菌(C.welchii)或产气荚膜杆菌(Bacillus perfringens)[1]，1891年，由医学博士Wlliam H. Welch和同事进行尸检时发现。它是一种重要的人畜共患细菌性病原，广泛存在于土壤、污水、食物等自然环境以及动物及人类的肠道中[2]。作为条件致病菌，能引起多种动物，包括绵羊、山羊、牛、猪、禽类、犬、家兔、驯鹿、羊驼等坏死性肠炎、肠毒血症，并能导致人的气性坏疽和食物中毒。菌体自身不致病，依靠其分泌的外毒素造成机体损害[3]，主要分泌α、β、ε、ι四种外毒素，而根据毒素产生种类的不同，该菌可分为A、B、C、D、E五型[2]。由B型和D型产气荚膜梭菌产生的ε毒素[4]，对小鼠的LD50为100 ng/kg，在该菌所有外毒素中毒力最强，也是继肉毒杆菌毒素和破伤风毒素之后的世界第三大毒力细菌外毒素，是潜在的生物恐怖主义战剂，被美国疾控中心(CDC)列为B类生物制剂[5]。

疫苗免疫是防制产气荚膜梭菌病的重要手段，而目前广泛应用的类毒素疫苗存在诸多弊端，如生产过程需添加动物组织、批间差异大、抗原成分复杂、有效抗原含量低。为此，本研究在前期产气荚膜梭菌突变体研究[12]的基础上，对突变体重组蛋白表达条件进行优化，使可溶性表达比例进一步提高，这将为产气荚膜梭菌突变体的进一步研究提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料 pETXm3质粒为本实验室保存； 12%SDS PAGE预制蛋白胶、NuPAGETMMES SDS Running Buffer (20X)、NuPAGETMTransfer Buffer (20X)；BL21(DE3)感受态细胞、IPTG购自宝日医生物技术(北京)有限公司；硫酸卡那霉素购自北京索莱宝科技有限公司；……