陈 思，杜红方，陈书琴，王 敏，谢德欢，冯新雨，杨 博，郭玉光*

（1.广东溢多利生物科技股份有限公司，广东珠海 519060；2.华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510000）

博落回为罂粟科植物博落回的提取物，功能性成分为血根碱和白屈菜红碱，具有抑制病原微生物遗传物质的合成和转录，改变病原微生物细胞膜通透性等类似抗生素的功能[1]。博落回能够降低空肠黏膜中诱导型一氧化氮合酶表达水平，起到抗炎效果[2]；同时能够增强血清淋巴细胞的功能进而提高机体免疫水平[3]；血根碱能够显著增加肠道内短链脂肪酸含量，而脂肪酸可以降低小肠pH，改善肠道内环境[4]。三丁酸甘油酯在脂肪酶的作用下水解为丁酸和甘油，在肠道修复和增强肠道功能方面受到关注。据报道，三丁酸甘油酯能够增强肠道ZO-1、claudin-1[5]和occludin[6]基因表达，加强肠道细胞间的紧密连接，促进肠道黏蛋白分泌[7]，增强肠道免疫屏障作用；同时调控肠道菌群分布，增加十二指肠和盲肠段有益乳酸菌数量[8]，降低后肠大肠杆菌和沙门氏菌数量[9]。

近年来，关于博落回、三丁酸甘油酯在畜禽养殖中的研究较多，但未见两者联合使用替代抗生素的黄羽肉鸡养殖报道。本试验旨在研究博落回、三丁酸甘油酯联合使用替代抗生素对黄羽肉鸡生长性能、血清生化指标和肠道形态的影响，为现实替抗提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料 抗生素为亚甲基水杨酸杆菌肽，含量为15%，由绿康生化股份有限公司提供。博落回购自湖南美可达公司，血根碱含量为0.15%。三丁酸甘油酯产品取自广东溢多利生物科技股份有限公司，其中三丁酸甘油酯含量为35%，其余部分为载体，成分为次粉。

1.2 试验设计 挑选健壮、活泼、均匀1 日龄黄羽肉仔鸡1 600 羽，随机分为5 个处理组，每个处理8 个重复，每重复40 羽。对照组饲喂基础饲粮，抗生素组在基础饲粮中添加亚甲基水杨酸杆菌肽 200 g/t，试验组分别在在基础饲粮添加博落回400 g/t（博落回组）、三丁酸甘油酯产品1 000 g/t（三丁酸组）、博落回400 g/t+三丁酸甘油酯1 000 g/t（博落回+三丁酸组）。试验期56 d，分为1～28、29～56 日龄。试验饲粮组成及营养成分见表1。

表1 基础饲粮组成及营养成分（风干基础）

1.3 饲养管理 试验在广东溢多利生物科技股份有限公司乾务动物试验基地的鸡舍进行。试验全期采用笼养，自由采食和饮水。进鸡雏前1 周，将鸡舍及设备进行严格清洗和消毒。采用红外灯和风机控温，第1 周舍温控制在31～33℃，第2 周舍温29.5℃，第3 周开始脱温，每日于14:00 点记录鸡舍温度。鸡舍相对湿度60%～65%。按常规免疫程序接种鸡群，即1 日龄注射新城疫灭活疫苗和新支二联苗、法氏囊疫苗滴口，14日龄注射禽流感疫苗。

1.4 测定指标及方法

1.4.1 生长性能 试验期间严格记录日投料量、余料量、死淘数。分别在试验第29 和57 天08:00 以重复为单位空腹称重（禁食12 h，仅供饮水），同时称量各重复组剩余饲料重。每日观察鸡只健康状况，淘汰病弱鸡，统计死亡率。计算各试验组各个阶段的平均日采食量（ADFΙ）、平均日增重（ADG）、耗料增重比（F/G）和死亡率。

1.4.2 血清生化指标 在试验第57 天，从每个重复组随机选取1只接近平均体重、健康的公鸡静脉采血样10 mL，4 000 r/min 离心15 min，分离血清于2 mL EP 管中。采用放射免疫法测定三碘甲状腺原氨酸（T3）和甲状腺素（T4），使用日立7 600 全自动生化仪检测总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）和尿素氮（UΝ）。采用免疫球蛋白酶联免疫反应试剂盒检测血清免疫球蛋白G（ΙgG）和免疫球蛋白M（ΙgM）。试剂盒由南京建成生物工程研究所提供，具体操作按试剂盒说明进行。

1.4.3 肠道形态 在试验第57 天，从每个重复组随机选取1 只接近平均体重、健康的公鸡处死后解剖取十二指肠、空肠、回肠统一位置的肠道片段2 cm，取出后用生理盐水反复冲洗，将冲洗干净的肠段贮存于10%中性福尔马林缓冲液中固定，24 h 后采用苏木精-伊红（HE）染色，制成石蜡切片，在每个切片上选取5 个典型视野（绒毛完整且走向平直），分析计算绒毛高度（VH）、隐窝深度（CD）和绒毛高度/隐窝深度（VH/CD）。

1.5 统计分析 试验数据经过Excel 处理后，利用ΙBM SPSS 20.0 统计软件进行单因素方差分析（One-Way AΝOVA），差异显著时采用Duncan's 方法进行多重比较，结果以平均值±标准差表示，P＜0.05 为差异显著，0.05＜P＜0.1 为存在差异趋势。

2 结果

2.1 博落回与三丁酸甘油酯联用替代抗生素对不同阶段黄羽肉鸡生长性能的影响 如表2 所示，1～28 日龄，与对照组相比，博落回+三丁酸组FBW 和ADG 提高（P＜0.05），博落回+三丁酸组、抗生素组和博落回组F/G 降低（P＜0.05）；与抗生素组相比，博落回组和三丁酸甘油酯组FBW、ADG 和F/G 均无显著差异。

表2 博落回和三丁酸甘油酯对黄羽肉鸡生长性能的影响

29～56 日龄，与抗生素组相比，博落回+三丁酸组的FBW 和ADG 提高（P＜0.05），F/G 和ADFΙ 差异不显著；与对照组相比，博落回+三丁酸组FBW 和ADG提高（P＜0.05），F/G 和 ADFΙ 差异不显著；除博落回+三丁酸组外，其他组FBW、ADG 和F/G 均不显著。

1～56 日龄，博落回+三丁酸组的ADG、FBW 和F/G 与抗生素组均无显著差异，均优于对照组（P＜0.05）；博落回组、三丁酸组ADG、F/G 与抗生素组无显著差异。

2.2 博落回与三丁酸甘油酯联用替代抗生素对黄羽肉鸡血液生化指标的影响 如表3 所示，与抗生素组相比，三丁酸组血清中TP、GLB 含量提高（P＜0.05）；博落回组、三丁酸组、博落回+三丁酸组和对照组血清UΝ降低（P＜0.05），博落回组和博落回+三丁酸组ΙgG 提高（P＜0.05）。与对照组相比，博落回+三丁酸组T3含量提高（P＜0.05）。

表3 博落回和三丁酸甘油酯对黄羽肉鸡血清生化指标的影响

2.3 博落回与三丁酸甘油酯联用替代抗生素对黄羽肉鸡肠道形态的影响 由图1 可知，抗生素组和博落回+三丁酸组十二指肠绒毛细长，绒毛间间距明显，无明显细胞脱落和绒毛损伤；对照组空肠绒毛前端结构断裂，绒毛变短，肿胀增粗；抗生素组、三丁酸组和博落回+三丁酸组回肠黏膜结构完整，层次清晰，肠绒毛排列整齐，绒毛间及隐窝之间界限分明，肠道绒毛结构优于其他组。

图1 博落回和三丁酸甘油酯对黄羽肉鸡肠道形态结构的影响

由表4 可知，与对照组相比，抗生素组和博落回+三丁酸组的十二指肠VH 和VH/CD、空肠VH 升高（P＜0.05）；博落回+三丁酸组空肠VH/CD 升高（P＜0.05）；三丁酸组十二指肠VH 升高（P＜0.05）。与抗生素组相比，博落回组十二指肠VH 和空肠VH/CD 下降（P＜0.05）。

表4 博落回和三丁酸甘油酯对黄羽肉鸡肠道形态的影响

3 讨论

3.1 博落回和三丁酸甘油酯对黄羽肉鸡生产性能的影响饲料中添加博落回和三丁酸甘油酯能够替代抗生素起到促生长效果，如满意等[10]和胡丽贵等[11]研究表明，添加博落回提取物对断奶仔猪和黄羽肉鸡均具有促生长效果，且效果优于抗生素组（土霉素、抗敌素和黄霉素）。博落回的促生长效果的机制为血根碱能够抑制胆碱酯酶活性、刺激唾液分泌等作用，提高动物采食量[12-13]；博落回具有抗炎作用，能够通过介导肠组织黏膜相关信号通路，修复和改善黏膜和绒毛，促进肠道健康，促进肠上皮细胞的增殖和分化，从而提高对营养物质的吸收[14-15]。朱荣生等[16]研究发现，添加三丁酸甘油酯能够提高断奶仔猪的生产性能，且促生长效果优于添加杆菌肽锌的抗生素组。其作用机理可能是其产物丁酸在肠道中的促进黏膜成长和益菌效果[17]。与过往研究不同，本研究中，添加博落回和三丁酸甘油酯的生长性能较对照组有所提高，但均未达到抗生素组水平，单一添加博落回或三丁酸甘油酯未达到理想的替代抗生素作用。

本研究进一步发现，博落回和三丁酸甘油酯联用产生的促生长效果优于单一添加博落回或三丁酸甘油酯，并略优于抗生素组。其原因可能是博落回和三丁甘油酯联用时，表现在促肠道生长、抗炎和益菌上有协同作用。

3.2 博落回和三丁酸甘油酯对黄羽肉鸡血清生化指标的影响 血清生化指标是反映机体生理状态的重要指标，血清TP 和UΝ 反映机体对饲料蛋白的吸收和利用效率，TP 高、BUΝ 低说明对蛋白质的合成和利用率高，血清GLB 是衡量机体抗应激能力的重要指标，其数值与抗应激能力呈正相关[18]。相关研究发现，血清TP 和GLB 在一定范围内提升会提高机体的抗病力，增强机体免疫力[19]。ΙgG、ΙgM 是由骨髓来源B 淋巴细胞产生的2 种免疫球蛋白，能够参与机体体液免疫，其在血清中的含量能够反映出机体免疫力的强弱[20]。

朱荣生等[18]研究表明，饲粮中添加0.2% 三丁酸甘油酯和核苷酸提高了仔猪血清中TP 和ΙgA、ΙgG、ΙgM 含量。张勇等[21]研究表明，0.1%三丁酸甘油酯或牛至油对断奶仔猪血清TP、ΙgA、ΙgG、ΙgM 均无影响。本研究中，饲粮中添加1%三丁酸甘油酯提高了肉鸡56日龄血清TP 含量，表明三丁酸甘油酯可以调节机体内蛋白质的代谢，增强机体免疫能力。胡贵丽等[11]研究表明，饲粮中添加10、20 mg/kg 博落回能够可显著降低肉鸡血清UΝ 含量，与抗生素组效果相同。本研究中博落回和三丁酸甘油酯的联用降低了血清中UΝ 含量，这表明博落回和三丁酸甘油酯联用能够提高机体对饲料蛋白质的消化吸收和利用，进而减少血液中的氮沉积。

3.3 博落回和三丁酸甘油酯对黄羽肉鸡肠道黏膜形态的影响 小肠作为机体消化、吸收的主要场所，常常作为衡量动物肠道健康的重要标识，而小肠黏膜形态的完整性是保证动物消化吸收功能的基础。小肠绒毛高度越高，小肠的吸收面积就越大，隐窝越深，消化吸收功能就越低，VH/CD 越大，消化吸收能力就越强[22]。Chen等[23]研究表明，仔猪饲粮中添加50 mg/kg 的博落回（血根碱浓度＞1.5%）能够显著降低空肠CD，提高回肠VH，提高VH/CD。彭丽莎等[24]研究表明，饲粮中添加0.2%三丁酸甘油酯使肉鸡十二指肠和空肠VH 显著增长，CD 有降低趋势。类似的，Panda 等[25]研究表明，添加0.2%～0.6% 丁酸盐能够显著改善十二指肠的肠道形态。三丁酸甘油酯改善肠道形态的机理可能是能够通过促进肠黏膜ZOs 基因的表达，维持细胞间的紧密连接[26]。本试验中，博落回组和博落回+三丁酸甘油酯组的十二指肠VH 显著提高，博落回+三丁酸甘油酯组十二指肠、空肠VH/CD 显著高于对照组，与抗生素组无显著差异。说明三丁酸甘油酯和博落回能够有效替代亚甲基水杨酸杆菌肽，改善肠道形态，促进肠道健康。

4 结论

本试验结果显示，饲粮添加博落回和三丁酸甘油酯能提高黄羽肉鸡生长性能，且前期效果优于后期；饲粮添加博落回和三丁酸甘油酯能够增强机体免疫功能、显著改善空肠肠道形态，其作用效果与亚甲基水杨酸杆菌肽相当。