李文峰 张晓慧 张书

摘要 [目的]筛选最佳浓度NAA“腰楼大葱”生根培养基，比较组培苗和非组培苗的优劣。[方法]以“腰楼大葱”茎尖为外植体材料，接种到不同浓度NAA生根培养基上，将获得的组培苗与非组培苗进行田间对比试验。[结果]生根壮苗最佳NAA浓度为0.10 mg/L;组培苗与非组培苗的直立叶数和老叶个数均存在显著差异;非组培苗的平均倒伏叶数为6.40片，组培苗仅有3.29片，且存在极显著差异。[结论]“腰楼大葱”组培苗商品性明显优于非组培苗。

关键词 大葱;组织培养;倒伏叶

中图分类号 S-633.1  文献标识码 A

文章编号 0517-6611（2021）11-0100-02

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.11.027

开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Tissue Culture Technique and Field Comparative Study of ‘Yaolou scallion（Allium fistulosum）

LI Wen-feng， ZHANG Xiao-hui， ZHANG Shu

（Fuyang Academy of Agricultural Sciences， Fuyang， Anhui  236065）

Abstract [Objective] To select the best concentration of NAA ‘Yaolou scallion rooting medium， the advantages and disadvantages of tissue culture and non-tissue culture seedlings were studied. [Method] Shoot tips of ‘Yaolou scallionwere used as explants and cultured on different concentrations of NAA rooting medium. The tissue culture seedlings and non-tissue culture seedlings were compared in the field. [Result]The results showed that the optimum concentration of NAA was 0.10 mg /L， the number of erect leaves and the number of old leaves were significantly different between tissue-cultured and non-tissue-cultured plantlets， the average number of lodging leaves of non-tissue-cultured plantlets was 6.40， and that of tissue-cultured plantlets was only 3.29. There was a significant difference in the average number of lodging leaves between non-tissue culture seedlings and tissue culture seedlings. [Conclusion]The commercial quality of tissue-cultured plantlets was better than that of non-tissue-cultured plantlets.

Key words Allium fistulosum;Tissue culture;Lodging leaf

蔥起源于半寒地带，喜冷凉不耐炎热，原产自我国。我国各地广泛栽培，主要作为蔬菜食用，鳞茎和种子亦入药。葱可分为普通大葱、分葱、胡葱和楼葱。“腰楼大葱”为分葱，葱白为纯白色，具有叶色浓、辣味淡、品质佳的特点。栽培历史可上溯至明清时期，栽培地点紧邻阜阳市颍河河畔，土地肥沃，适宜大葱种植，家家户户不仅门前屋后都种植大葱，还有部分大户专业化种植大葱几十年，不仅行销周边地区，还远销至江苏、河南等地。除夏季外，“腰楼大葱”在初夏、秋季、初冬均可收获，是当地群众重要的经济收入来源。但是多年的种植，种苗携带的病菌逐渐增多，产量下降，品质降低，收益骤减。笔者以“腰楼大葱”为试材，对其茎尖进行组织培养及离体再生，以期为繁育出脱毒种苗提供基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料 供试品种取自安徽省颍上县腰楼村大葱种植基地。以“腰楼大葱”嫩芽为外植体材料。

1.2 试验地点 于2016年11月至2020年3月，在阜阳市农业科学院生物工程研发中心进行试验。

1.3 试验方法

1.3.1 组织培养。

将大葱嫩芽先用清水清洗，切除基部受伤部分，用适量洗洁精浸泡15 min，再用流水冲洗20 min;然后在超静工作台上先用75%乙醇消毒10 s，0.2% HgCl2消毒10 min，再用无菌水冲洗多次;在显微镜下挑取大葱嫩芽茎尖端部分，以0.2～0.4 mm最为合适;接种到诱导培养基（MS+BA 1.00 mg/L+NAA 0.10 mg/L+GA3 0.05 mg/L）上，30 d后进行扩大培养（培养基为MS+ BA 1.00 mg/L+NAA 0.05 mg/L）。

NAA浓度梯度设为0.05、0.10和0.30 mg/L，在光、暗环境下分别培养，进行生根培养基筛选试验。

选择NAA最适浓度培养基接种，在12h光/12h暗、平均温度22 ℃条件下培养30 d，从瓶装组培苗中，散点式选择9瓶组培苗，测定每瓶平均生根数、平均根长、平均叶片数、平均叶长。

1.3.2 田间对比。

选择根长达到2 cm、长势健壮的组培苗进行炼苗，组培苗经过炼苗和扩繁，形成一定基数的壮苗。随后，以非组培苗为对照，进行田间对比试验。设3次重复，试验连续进行2年。

1.3.3 数据分析。试验数据均采用Excel及DPS数据处理系统进行整理分析。

2 结果与分析

2.1 NAA浓度对生根的影响

由表1可知，NAA浓度为0.10 mg/L时，生根苗数均在20个以上，光、暗条件下分别为24、25个;生根率最高，分别为80.00%、83.33%;平均根数均达到2.5以上，分别为2.6、2.7条。可见，该条件下的生根效果最好，为最合适的培养条件，且光、暗环境处理之间无明显差异。

2.2 组培苗生长情况

随机选择9瓶进行比较，平均根数4.22 个，平均根长2.38 cm，平均叶数4.89片，平均叶长5.23 cm。利用DPS软件采用Tukey法对数据进行分析比较，②号瓶的各项指标较好，⑤号较差，存在较明显差异（表2）。

2.3 组培苗与非组培苗田间对比

组培苗直立叶数平均达到14.48片，非组培苗只有11.08个。组培苗倒伏叶数平均3.29片，非组培苗倒伏叶数是组培苗的2倍，达到6.40片。组培苗老叶数平均2.77片，非组培苗为4.19片。分蘖数、葱白长度、总长度和重量平均值差别不大（表3）。为进一步揭示各组之间差异显著性，利用DPS软件采用Tukey法对数据进行比较分析，结果显示组培苗与非组培苗的直立叶数和老叶数均存在显著性差异，倒伏叶数存在极显著差异，分蘖数、葱白长度、总长度和重量均无显著性差异。

3 讨论

（1）田间试验数据显示，“腰楼大葱”组培苗与非组培苗的直立叶数和老叶数均存在显著差异，倒伏叶数存在极显著差异;分蘖数、葱白长度、总长度和重量无显著性差异。综合分析，组培苗明显健壮，多直立不易倒伏，且老叶少，商品性明显优于非组培苗。从技术角度来讲，可大力推广使用组培苗。但是，组培苗的实际生产投入较大，农户不易进行原始苗的繁殖。

（2）该研究选用的外植体材料是“腰楼大葱”的茎尖，关于大葱茎尖的组织培养，陈典等[1-2]以章丘大葱茎尖为外植体，对大葱茎尖脱毒苗的培养和增殖技术进行了研究。张松等[3]利用分葱茎尖成功诱导了体细胞胚胎发生。关于大葱不同外植体离体培养再生主要利用的外植体还有种子[4-5]、子叶[6]、幼叶[5，7]、根[5，8]、花蕾[9-11]、成熟胚[12-13]和花序轴[14]，不同材料、不同外植体对其愈伤率的影响很大。

（3）组织培养过程中，发现了一些问题值得思考。例如，接种时，如果根部出现在培养基上方，未接触到培养基，会导致根变短，梢头变黄，枯死。若接种单株，则根较长，叶长而粗壮，如果是丛生株，则根细弱，叶片较多但细弱。因此，在接种时要保持根朝下生长，每瓶的接种量不宜过少，也不宜过多，以4～6个最优。组培苗中1株出现开花现象，可能是组培苗受到激素的影响，到生长后期，该组培苗植株明显变小，说明生殖生长影响营养生长。

参考文献

[1]

陈典，黄晓梅，姜玉东，等. 大葱茎尖脱毒苗培养及增殖技术的研究[J].园艺学报，2004，31（5）：673-675.

[2] 黄晓梅，陈典，梁艳，等. 热处理对大葱茎尖脱毒效果的影响[J].东北农业大学学报，2005，36（3）：306-309.

[3] 张松，李纪蓉，李滨，等.分葱组织培养体细胞胚胎发生的研究[J].园艺学报，1997，24（3）：264-268.

[4] 谢芝馨，张玉喜，于元杰.大葱组织培养中玻璃苗特性研究[J].西北植物学报，2004，24（11）：2146-2149.

[5] 杨俊杰，谭伟，彭金环，等.章丘大葱再生体系的建立及组培外植体的选择[J].云南农业大学学报，2008，23（4）：571-575.

[6] 穆春华.大葱组织培养与种质亲缘关系分析[D].泰安：山东农业大学，2002.

[7] 张松，张启沛.利用大葱幼叶进行组织培养微繁的研究[J].园艺学报，1995，22（2）：161-165.

[8] SANGLARD N A，AMARAL-SILVA P M，SATTLER M C，et al.From chromosome doubling to DNA sequence changes：Outcomes of an improved in vitro procedure developed for allotriploid “Hibrido de Timor” （Coffea arabica L. ×Coffea canephora Pierre ex A. Froehner）[J].Plant Cell，Tissue and Organ Culture，2017，131（2）：223-231.

[9] 張松，张启沛.大葱（Allium fistulosum L.）花蕾培养再生植株的研究[J].山东农业大学学报，1994，25（3）：277-282.

[10] IBRAHIM A M.Haploid induction of kenaf （Hibiscus cannabinus L.）， okra （Abelmoschus esculentus L.） and spring onion （Alium fistulosum L.） using anther， ovary and ovule cultures[D].Kelantan，Malaysia：Faculty of Agro-Based Industry， University Malaysia Kelantan，2016：11-26.

[11] IBRAHIM A M，KAYAT F B，SUSANTO D，et al.Haploid induction in spring onion （Alium fistulosum L.） via gynogenesis[J].Biotechnology，2015，15（1/2）：10-16.

[12] 盛艳萍，杨建平，齐宪磊，等.大葱成熟胚离体培养植株再生[J].生物技术， 2004，14（3）：54-55.

[13] 宗红，陈运起，王秀峰，等.大葱成熟胚培养再生植株激素浓度及配比的研究[J].山东农业科学，2006，38（5）：23-25.

[14] 李娜，贾俊香，杨国栋，等.大葱花序轴组织培养初步研究[J].园艺与种苗，2019，39（12）：1-2，58.