陈晓军 郭成瑾 王喜刚 沈瑞清

摘要 利用双抗体夹心酶联免疫吸附法分离得到了PLRV宁夏分离物，并采用RT-PCR技术分离得到了宁夏分离物外壳蛋白基因CP的核苷酸序列，PLRV CP基因共624 bp，推测编码208个氨基酸残基，分子量大小为23 234.2，等电点11.85。通过同源性分析，其与2013年内蒙古分离物（KC456052）最为接近，同源性达99.8%;进化树分析发现其有一定的地理区域性，为单独分支起源。

关键词 马铃薯卷叶病病毒;反转录;宁夏PLRV分离物

中图分类号 S-435.32;S-432.4  文献标识码 A  文章编号 0517-6611（2021）11-0096-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.11.026

开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Molecular Biological Identification of Potato Leafroll Virus from Field Samples in Ningxia Province

CHEN Xiao-jun1， GUO Cheng-jin2， WANG Xi-gang2 et al

（1.Agricultural Biotechnology Center， Ningxia Academy of Agriculture and Forestry Sciences/Key Lab of Agricultural Biotechnology of Ningxia， Yinchuan， Ningxia 750002;2.Institute of Plant Protection， Ningxia Academy of Agriculture and Forestry Sciences /Key Laboratory of Plant Disease and Pest Control， Yinchuan， Ningxia 750002）

Abstract PLRV CP gene was isolated from Ningxia by DAS-ELISA method. The nucleotide sequence of CP gene of PLRV isolated from Ningxia was obtained by RT-PCR. The total length of PLRV CP gene was 624 bp. It was inferred that PLRV CP gene encoded 208 amino acid residues with molecular weight of 23 234.2 and pI of 11.85. Through homology analysis， it was the closest to the isolate （KC456052） from Inner Mongolia in 2013， with 99.8% homology;phylogenetic tree analysis showed that it had a certain geographical region， which was a single branch origin.

Key words PLRV;RT-PCR;Ningxia isolate

马铃薯卷叶病毒（potato leafroll virus，PLRV）是导致马铃薯严重减产的病毒病，通过蚜虫传播，也通过感染病毒的块茎传播，造成30%～80%的产量损失[1]。马铃薯作为宁夏南部山区重要的粮食、蔬菜兼用的经济作物，种植面积达109 927 hm2[2]。马铃薯病毒病时常蔓延，其中PLRV导致马铃薯产量和质量大幅下降。我国已对内蒙古、青海、甘肃、广东、河北等省区的PLRV分离物进行同源性分析，然而宁夏仍缺乏该病毒分离物的序列分析。为此，笔者利用双抗体夹心酶联免疫吸附法分离得到了PLRV宁夏分离物，并采用RT-PCR技术分离得到了宁夏分离物外壳蛋白基因CP的序列，为该病毒病的防治和流行病学奠定研究基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂。

马铃薯PLRV病毒ELISA试剂盒购于黑龙江省农业科学院，RNA提取试盒为SV Total RNA Isolation System（promega）;RNA反转录试剂盒为mProm-II Reverse Transcriptase（promega）、离心柱型琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒为Wizard SV Gel and PCR Clean-up System（Promega）;T连接载体试剂盒为北京全式金生物技术公司的pEasy-Blunt Simple Coning Kit，Pfu DNA聚合酶与DNA分子量marker为天根生物技术公司产品;引物由北京奥科鼎盛公司合成;其余试剂均为分析纯。……