田心蓓 陈珊珊 王伟鹏 吴 博 朱 景 周 莹 肖永陶

上海交通大学医学院附属新华医院 上海市儿科医学研究所 上海市小儿消化与营养 重点实验室（上海 200092）

胆道闭锁（biliary atresia，BA）是发生在婴幼儿时期的一种胆汁淤积性肝病，主要表现为肝内外胆管闭锁及持续性黄疸[1-2]。肝门空肠吻合术（Kasai术）是临床治疗BA 的首选方案，但术后持续性胆汁淤积及进行性肝损伤和纤维化，极大地制约了手术效果，使得BA 成为儿童肝移植最常见原因，占全部儿童肝移植的40%～50%[3]。因此，减轻肝内胆汁淤积成为BA临床干预的重要手段。

研究报道，巨噬细胞在BA肝损害中起重要作用，但作用机制仍不明确[4]。胆管结扎是模拟BA 肝外胆管闭锁的重要模型[5]。利用小鼠对白喉毒素（diphtheria toxin，DT）不敏感这一特点，通过将人类白喉毒素受体（diphtheria toxin receptor，DTR）基因转入小鼠CD 11 B 启动子后可以特异性敲除小鼠体内巨噬细 胞[6]。本研究将利用转基因小鼠（CD11b-DTR）及胆管结扎（bile duct ligation，BDL）小鼠模型研究巨噬细胞对BA胆汁酸代谢紊乱的作用机制，为临床干预BA疾病进程提供新的思路和靶点。

1 材料与方法

1.1 动物模型与分组

7 周龄CD 11 b-DTR 小鼠接受BDL 或假手术，术后饲养于清洁环境中。将小鼠随机分为假手术组（Sham）、假手术干预组（DT）、胆管结扎组（BDL）及胆管结扎干预组（BDL+DT），Sham 组、DT 组各6 只小鼠，BDL、BDL+DT 组各8 只小鼠。术后DT 组和BDL+DT 组每隔2 天腹腔注射1 剂DT（剂量：25 ng/g小鼠体质量）以敲除小鼠体内巨噬细胞，Sham组和BDL 组每隔2 天腹腔注射生理盐水作为对照，小鼠存活2周后在最后1剂注射24小时后颈椎脱臼处死小鼠，使用灭菌手术器械分离出小鼠肝脏和结肠，将肝脏放入无菌冻存管后冷冻于-80 ℃冰箱；……