桂林，梁春慧，于溯洋，程敏静，卞红磊

研究发现，结肠癌组织中存在Afadin蛋白磷酸化水平的改变[1]，与此同时，Afadin作为Akt的底物之一，其磷酸化状态参与调控结肠癌细胞的迁移及侵袭能力。在某些类型的肿瘤中，榄香烯能够对PI3K/Akt信号通路的活性产生影响，上调或下调底物磷酸化水平[2]，由此推测，榄香烯可能也会对结肠癌细胞内Afadin的磷酸化水平产生影响，为了验证这种假设，现利用β-榄香烯对结肠癌SW480细胞进行处理，观察细胞内Afadin蛋白磷酸化水平的改变并分析其对细胞迁移以及侵袭的影响，报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料 (1)细胞：结肠癌SW480细胞购自美国典型培养物保藏中心。(2)药品与试剂：β-榄香烯购自石药集团远大制药有限公司，重组人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)购自R&D公司，2-吗啉代-8-苯基色酮(LY294002)、兔抗人Afadin多克隆抗体及抗人磷酸化Afadin抗体购自Abcam公司，兔抗人Akt 抗体和抗人磷酸化Akt 抗体购自Cell Signaling 公司，内参GAPDH抗体购自Cst 公司，基质胶购自BD公司，BCA蛋白定量试剂盒及ECL发光检测试剂盒购自碧云天生物技术公司。(3)仪器设备：Transwell小室购自美国Corning公司，培养箱购自美国REVCO公司，BX53显微镜购自日本Olympus公司。

1.2 实验方法 2019年10月—2020年1月于河北中医学院实验中心进行实验。将SW480细胞分为6组。对照组：取复苏后的结肠癌SW480细胞10 ml(细胞浓度为5×106/ml)，用含有10%胎牛血清的RPMI-1640培养基在37℃、含有5%CO2饱和湿度的培养箱中培养；IGF-1组：细胞培养同对照组，培养基中加入IGF-1，使其最终浓度达到50 ng/ml；LY294002组：细胞培养同对照组，培养基中加入LY294002，使其最终浓度为10 μmol/L；榄香烯组：细胞培养同对照组，培养基中加入β-榄香烯，使其最终浓度达到20 μg/ml；……