胡 岚，王 鹤，王 超，齐文杰

(首都医科大学附属北京友谊医院感染内科 100050)

随着抗生素的广泛应用，细菌耐药现象日益严重。噬菌体作为一种可以杀灭细菌的病毒，有着抗生素无法比拟的优势，同时，由于它的生物学特性，对于临床推广和应用也有很大的局限。深入的了解噬菌体的特性，以及它在吞噬细菌后对于细菌可能产生的影响，对于将来发展噬菌体疗法以应对泛耐药细菌的危害有着一定的意义和价值。本研究探讨一株泛耐药肺炎克雷伯菌噬菌体的分离及其对细菌耐药性变化的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

本院细菌室保存的一株泛耐药肺炎克雷伯菌菌株。液体LB培养基：胰蛋白胨(英国Thermo Fisher Scientific公司)10 g，酵母提取物(英国Thermo Fisher Scientific公司)5 g，NaCl 10 g，加去离子水(或蒸馏水)至1 L，pH 7.4；0.7%半固体 LB 培养基：胰蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，NaCl 10 g，琼脂粉(美国Sigma公司)7 g，加去离子水(或蒸馏水)至 1 L，pH 7.4；1.5%固体 LB 培养基：胰蛋白胨 10 g，酵母提取物5 g，NaCl 10 g，琼脂粉 15 g，加去离子水(或蒸馏水)至 1 L，pH 7.4。将上述培养基配置完毕后送消毒供应室高压灭菌。SM液：100 mmol/L NaCl，100 mmol/L MgSO4，50 mmol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲液(美国Amresco公司)，pH 7.5，送消毒供应室高压灭菌。CaCl2，氯仿，聚乙二醇PEG8000(美国Sigma公司)。0.45 μm、0.22 μm生物滤膜(美国Millipore公司)。

1.2 方法

1.2.1菌株的制备

一株泛耐药肺炎克雷伯菌菌株通过血培养基培养方式进行保留、传代。无菌条件下划线法接种在固体LB平板上，经过37 ℃过夜培养，次日挑选独立菌落接种于10 mL的液体LB培养液(或肉汤培养液)中，37 ℃ 160 r/min振荡培养6 h至对数生长早期，本研究所用菌均为对数生长早期致病菌。

1.2.2污水标本制备