程变巧 黄志腾 林园香

原发性肝癌是严重危害人类健康的第4大恶性肿瘤之一，据世界卫生组织统计，每年仍有一定的比例发生[1-2]。目前研究认为肝癌的发生离不开炎症和癌细胞的免疫逃逸[3]，慢性炎症通过抑制免疫监测(immunosurveillance)来促进癌症产生。因肝癌中常见原因是慢性乙型病毒性肝炎，因此提出没有炎症，就没有肿瘤的假说。在我国，慢性乙型病毒性肝炎—肝硬化—肝癌仍是肝癌发生的三部曲。肝脏内的炎症一般经过5年左右就会向肝硬化、肝癌的方向发展。其中炎症可以启动肝星状细胞的活化[4-6]，后者可以引起肝硬化和肝癌。因此抑制肝星状细胞的活化可望降低肝癌的发生。本课题通过改变肝星状细胞与肝癌细胞共培养体系，观察对肝癌的炎症和免疫的影响，预期为肝癌的生物学治疗提供新的治疗策略。

1 材料与方法

1.1 细胞培养 人源LX-2及SMMC7721细胞株均由孟超肝胆医院重点实验室惠赠，本课题在本中心完成。用含有10%胎牛血清(ExCell FND500)+1%双抗(Hyclone SV30010)的DMEM(Hyclone SH30022.01)高糖培养基，于37℃、5%CO2的培养箱中培养，根据生长情况进行传代。

把LX-2肝星状细胞系以3×105个/孔接种于六孔板中12 h后，加入10μg/L TGF-β1[4]24 h后，离心，收集上清液，并加入到预先生长率达60%的SMMC7721细胞中继续培养48 h，加入Disitetide(HY-P0118)12 h后进行后续研究。

1.2 EILSA检测 按照操作说明书，采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测白细胞介素-8(IL-8)与白细胞介素-10(IL-10)的表达。取外周血2 000 rpm离心10 min，取上清液待检。具体步骤如下，加样：每个血清样本设置3个孔，每孔加标准液100μL，37℃放置40 min；洗板：洗涤液洗4～6次，滤纸上印干(下同)；加蒸馏水25μL，一抗25μL，充分混匀后37℃放置20 min；……