王晓敏，刘瑞雪，杨杰，于梦雨，付刚

（潍坊市益都中心医院 1病理科；3泌尿外科，青州 262500；潍坊医学院附属医院 2口腔科，潍坊 261000）

骨肉瘤是一种主要发生于儿童和青少年的恶性肿瘤。病理性骨折及早期肺转移是主要的临床表现。尽管外科治疗和化疗方案不断改进，但是治疗效果仍然很差、生存率仍然很低[1]。因此，探索骨肉瘤的发生机制及寻求有效的治疗靶点及对于提高骨肉瘤的治疗效果是非常有必要的。微小RNA（microRNA,miRNA）代表内源性小片段非编码RNA家族，其长度约18～25个核苷酸，主要通过调控转录后翻译调节生物学过程[2]。研究发现调控miRNA的表达可能成为肿瘤的治疗靶点[3]，miRNA-132与宫颈癌、结直肠癌等多种恶性肿瘤的发生发展有关[4,5]。但miRNA-132在骨肉瘤中的作用及机制尚无明确报道。本研究通过观察比较miRNA-132在骨肉瘤细胞系U2OS、MG63和143B中的表达水平，并通过质粒转染干预miRNA-132在骨肉瘤细胞系中的表达，检测肿瘤细胞增殖和侵袭能力的变化，探讨miRNA-132在骨肉瘤发生发展中的作用。

材料与方法

1 主要试剂

TRIzol试剂 (Life Technologies)，反转录及荧光定量PCR的相关试剂 (Takara，Dalian)，细胞培养用的胎牛血清（Gibco），高糖MEM（Hyclone），无血清DMEM（Gibco），促进miRNA-132表达质粒（pRFP-miRNA-132-up）及抑制miRNA-132表达质粒（pRFP-miRNA-132-down质粒）（上海吉凯），Lipofectamine 3000 (Thermo Fisher Scientific)，EdU试剂盒（广州锐博生物）。Transwell小室（Corning Incorporated，33117045）。

2 细胞株、细胞培养及转染

人骨肉瘤细胞系U2OS、MG63、143B购买自ATCC细胞库，用含10%胎牛血清 (fetal bovine serum, FBS, Gibco)的高糖MEM (Modified Eagle's medium, MEM, Hyclone)培养基。37℃、含5%CO2的细胞培养箱中培养。细胞生长至对数生长期，按照Lipofectamine 3000试剂盒说明进行质粒转染。转染pRFP-miRNA-132-up、pRFP-miRNA-132-down质粒为实验组，转染空载质粒作为对照组，转染24h、48h、72h后提取RNA通过RT-qPCR检测转染效果。……