阳莉，丘秀生，胡元，陈晓燕，陈伟材，卢建溪*

（1中山大学附属第三医院生物治疗中心，广州510000； 2中山大学附属第三医院疫苗研究所，广州510000；3东莞长安港湾医院内科，东莞 523000）

自然杀伤细胞（natural killer cell, NK细胞）是机体内的固有免疫细胞，负责杀伤老化、受病毒感染、肿瘤等异常细胞，并且无MHC限制性，它能自己识别和攻击外来病毒、癌细胞和异常细胞[1～3]。目前，NK细胞不仅广泛用于肿瘤病人的免疫治疗，还可应用于预防肿瘤发生及提高亚健康人群生活质量[4]。

检测NK细胞杀伤活性是评估体外培养的NK细胞生物学功能的主要方法。目前检测细胞毒性的方法有同位素释放法、MTT法、CCK-8法、LDH释放法、Calcein-AM释放法和流式细胞术等方法。同位素的方法对设备要求较高，费用较高，操作繁琐，又存在放射性污染的问题，使其推广使用受到限制；而酶反应比色法容易受各种因素影响致结果出现较大差异，重复性不佳；流式细胞技术可在单细胞水平分析细胞的自然凋亡和靶细胞的死亡，是近几年发展的一种方法[5～7]。本研究选取流式细胞术和LDH的方法检测体外培养的NK细胞对K562细胞的杀伤活性，对检测结果进行分析，优化了细胞浓度和效靶细胞比，为NK细胞功能评估提供稳定可靠的检测方案。

材料与方法

1 样本来源

白血病细胞株K562为本实验室保存。14例肿瘤患者外周血均来自中山大学附属第三医院岭南医院，其中男7例，女7例，年龄40～85岁，平均年龄（59.57 ± 3.38）岁，所有患者均签署知情同意书。

2 主要仪器与试剂

ALYS505NK-AC培养液和ALYS505NK-EX培……