侯超 郭倩颖 刘欣然 刘思奇 麻慧娟 刘珊 王军波

基因工程技术应用于新品种作物栽培已有近40年历史，该技术为人类应对粮食短缺和农作物病虫害提供了有效途径[1]。1993年转入Bt(Bacillus thuringiensis)基因的抗虫玉米研发问世，抗虫玉米的应用解决了玉米螟对作物的啃食问题，减少了抗虫农药使用量，在保护环境和提高经济收益方面产生了积极影响[2]。然而，近年来，基因工程作物食用安全性问题存在争议[1-4]。对基因工程作物开展研究可以考察其食用安全性，并为进一步应用提供依据。欧洲替代方法验证中心(European Center for Validation of Alternative Methods, ECVAM)推荐的胚胎细胞微团培养试验为有效性较高的体外胚胎毒性发育试验[5]，腭板培养也是研究受试物对实验动物发育影响和机理的主要手段[6]。因此，本研究通过大鼠中脑细胞微团培养和腭板培养两种方法，对基因工程玉米Bt799及目的蛋白Cry1Ac进行了发育毒性研究，为基因工程作物食用安全性评价提供了实验参考依据。

材料与方法

一、受试物

Cry1Ac蛋白冻干粉(95%～98%)(Laboratory of Biochemistry Dept，School of Medicine, Case Western Reserve University)，基因工程玉米Bt799(中国农业大学)。Bt799玉米转入了Cry1Ac基因，各部位可稳定表达Cry1Ac蛋白，种子中Cry1Ac蛋白表达量为(130.0±1.3)ng/g(n=3)。亲本玉米郑58种子中未检测到Cry1Ac蛋白。两种玉米主要营养成分见表1。

表1 Bt799玉米和郑58玉米主要营养成分对比(mean±SD, n=3, g/100 g)

二、实验动物

SPF级健康未生育雌性Wistar大鼠，9周龄，体重(200±20)g；SPF级健康未生育雄性Wistar大鼠，9周龄，体重(300±20)g。大鼠按雌雄比1∶1于18:00合笼并于次日8:00检查阴栓，以查见阴栓之日为孕0 d。雌鼠全部受孕后，使用加工饲料按照分组喂养雄鼠并制备即刻离心血清(immediate centrifugation serum, ICS)，制备后使用ELISA试剂盒检测ICS中Cry1Ac蛋白含量。……