程若溪 赖铭裕 蒋莉萍 吴谢慧 梁 凯

(广西医科大学第一附属医院老年消化内科，南宁市 530021，电子邮箱:294213913@qq.com)

胃癌是世界范围内发病率较高的癌症，其发病率位于全球第5位，死亡率居全球第4位[1]。2019年，中国胃癌发病率约为43.1/10万，病死率为29.6/10万[2]，严重威胁我国人民的生命健康。因此，探索胃癌的发病机制至关重要。微小RNA(microRNA,miR) 是真核生物进化中出现的小核糖核酸，主要作用是抑制非必需遗传物质或转录物质，大多数miR由非编码或编码mRNA的内含子编码。miR长约22个核苷酸，通过与mRNA的3′非编码区结合，从而调控基因表达，发挥主要作用的是miR5′末端第2～7位的核苷酸[3]。大量研究显示，miR-126在肿瘤的发生中发挥重要作用[4-7]。高尔基体磷蛋白3(Golgi phosphoprotein 3， GOLPH3)是新近发现的一种癌基因，定位于反面高尔基体[8]。我们前期研究发现，胃癌患者外周血中miR-126呈低表达，而GOLPH3的表达与miR-126的表达呈负相关[9]。但miR-126是否通过GOLPH3调控胃癌细胞的生长、侵袭及转移尚不明确。因此，本研究通过慢病毒转染的方式构建miR-126沉默及过表达的胃癌细胞株，探讨miR-126对胃癌细胞增殖、侵袭、转移能力的调控作用及其可能机制。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂 胃癌细胞株SGC-7901购自中国科学院细胞库；RPMI-1640培养基购自Gibco公司(批号：8120394)；特级胎牛血清购自BI公司(批号：04-001-1ACS)。miR-126-mimic/miR-126-mimic-NC(批号：9748-2/LVCON220)及miR-126-inhibitor/miR-126-inhibitor-NC(批号：4783-1/LVCON137)慢病毒由上海吉凯基因公司提供。总RNA提取试剂TRIzol、反转录试剂、实时荧光PCR试剂及引物均购自大连Takara公司(试剂批号：9108、RR047A、RR820A)。高效RIPA裂解液、蛋白磷酸酶抑制剂混合物、蛋白上样缓冲液购自索莱宝公司(批号:R0010、P1260、P1015)；GOLPH3单克隆抗体购于Abcam公司(批号：ab98023)；……