王茂鑫，陈贤明，龚宏勋，陈十燕，杨 帆，陈 函

0 引 言

鼻咽癌是头颈部常见恶性肿瘤之一，我国东南地区多发，近年来有增多趋势。放疗是鼻咽癌的首选治疗方法，但是鼻咽癌的放疗抵抗和复发仍是鼻咽癌治疗中的难点[1-3]。我们的前期工作已发现，抑制鼻咽癌细胞中环指蛋白8(ring finger protein 8, RNF8)的表达能够提高肿瘤细胞对放射线的敏感性[4]。但有关干扰RNF8基因表达在体内是否会提高鼻咽癌的放疗敏感性，目前还未见报道。本实验采用小干扰RNA(small RNA interference,siRNA)沉默CNE1细胞的RNF8基因,筛选出稳定转染的细胞,注入裸鼠体内，建立移植瘤模型，探讨RNF8与鼻咽癌放疗抵抗的关系及沉默RNF8与鼻咽癌放疗敏感性之间的关系。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞和主要试剂鼻咽癌CNE-1细胞系购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。RNF8沉默的CNE-1稳定转染细胞来自原福州总医院[1]。RNF8抗体(美国Santa Cruz公司)，共济失调毛细血管扩张症突变基因(ataxia-telangiectasia mutate,ATM)抗体(美国Biovision公司)，DNA依赖蛋白激酶催化亚单位(DNA dependent protein kinase catalytic subunit,DNA-PKcs)抗体(美国Thermo公司)，异硫氰酸荧光素(Fluorescein Isothiocyanate， FITC)标记的兔抗鼠二抗(美国Sigma公司)。AnnexinV-FITC (Abcam, Cambridge, UK)。

1.1.2 动物BALB/c裸鼠30只购自军事医学科学院实验动物中心(实验动物许可证号：2019-0496)；本实验经联勤保障部队第九○○医院伦理委员会批准(批准号：2016-021)。鼠龄3～4周龄，体重12～18 g，均为雄性，在无特定病原体(SPF)、恒定温度(22～25 ℃)的无菌层流动物房内饲养，经高压灭菌饲料和水供动物自由食用。

1.1.3 主要仪器荧光倒置显微镜(德国Leica公司)，BCM-1000A型生物洁净工作台(苏州安泰空气技术有限公司)，酶标仪(美国Bio-Rad公司)，流式细胞仪(美国Becton Dickinson FAC Sort公司)，2100C型直线加速器(美国Varian公司)。……