刘仁海，穆伽俐，陈小莲，张玉佳，高霞，李黎黎，罗琴，冯秋秋，何思宇，蒲丹岚

糖尿病肾病是糖尿病常见并发症之一，并可促进终末期肾病的发生，其中肾小管间质纤维化是造成慢性肾病发展的重要原因。研究表明上皮-间质转化（EMT）在肾小管间质纤维化形成过程中发挥重要作用，其中氧化应激、微小RNA（miRNA）、信号通路等与EMT的发生及发展密切相关。微小RNA-126-5p（miR-126-5p）在脂多糖诱导的急性肺损伤中呈低表达，上调miR-126-5p表达可减轻急性肺损伤。生物信息学分析显示pellino E3泛素蛋白连接酶家族成员2（Peli2）可能是miR-126-5p的靶基因，研究表明Peli2表达量升高可加重脂多糖诱导的急性肺损伤。本研究从2018年12月至2019年12月期间通过高糖诱导肾小管上皮细胞模拟糖尿病肾病环境，验证miR-126-5p是否可通过靶向Peli2抑制糖尿病肾病肾小管上皮细胞EMT发生。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

人肾小管上皮细胞HK-2购自美国ATCC公司；D-葡萄糖购自上海甄准生物；Lipofectamine2000购自美国Invitrogen；miR-126-5p寡核苷酸模拟物（miR-126-5p mimics）及阴性对照mimic NC序列（miR-NC）、Peli2小干扰RNA（si-Peli2）、乱序无意义阴性序列（si-NC）购自广州锐博生物；pcDNA3.1购自武汉淼灵生物；Trizol、反转录试剂盒、荧光定量PCR试剂盒均购自日本TaKaRa；RIPA裂解液购自上海联迈生物；二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate，SDS）购自杭州弗德生物；兔抗人Peli2抗体购自美国CST公司；兔抗人上皮型钙黏蛋白（ECadherin）、神经型钙黏蛋白（N-Cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、锌指蛋白（Snail）抗体购自北京中杉金桥生物；山羊抗兔二抗购自武汉艾美捷。

1.2 方法

1.2.1 实验分组

收集对数期HK-2细胞，使用含有30 mmol/L的D-葡萄糖培养基培养48 h，记作HG组；使用含有5 mmol/LD-葡萄糖培养基培养48 h，记作对照组。……