徐汉桥，方军，张梁

肺癌是一个多基因共同调控的复杂事件，尽管围绕肺癌机制的研究取得了部分进展，但临床治疗肺癌的药物效果并不理想，因此寻找新的有效的治疗靶点一直是包括肺癌在内的肿瘤研究的热点。我们采用生物信息学软件预测发现，微RNA（miR）-130a与人类RUNT相关转录因子3（RUNX3）3’非翻译区（UTR）存在互补的核苷酸序列，猜测miR-130a可能通过靶向调控RUNX3介导非小细胞肺癌的发生发展。为了验证上述猜测，本研究于2018年2月至2019年5月以肺癌A549细胞为研究对象，通过观察miR-130a与RUNX3的靶向关系以及其对A549细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化的影响，旨在阐明miR-130a在肺癌发生中的作用，以期为以miR-130a为靶点的肺癌治疗提供新的参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料

非小细胞肺癌细胞株A549（中科院上海细胞库），胰蛋白酶、3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）试剂和青链霉双抗（美国Sigma公司）。兔抗人上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、神经型钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）多克隆抗体（英国Abcam公司），辣根过氧化酶标记的二抗（北京中杉金桥生物公司），DMEM培养基、胎牛血清和Transwell小室（美国Hyclone公司），Matrigel基质胶（美国BD公司），miR-130a mimics、miR-130a inhibitor及其对照和RUNX3-siRNA及对照NC-siRNA（上海吉玛公司）。转染试剂脂质体2000、青链霉素（美国Invitrogen公司），鼠抗人RUNX3单克隆抗体和β-actin多克隆抗体（美国Santa Cruz公司），聚偏二氟乙烯膜（PVDF膜）（瑞典Amersham公司），脱脂奶粉（北京鼎国生物公司），Trizol试剂、逆转录试剂盒、逆转录PCR（RT-PCR）试剂盒和PCR扩增相关试剂（大连TaKaRa公司），BCA蛋白定量试剂盒、荧光素酶报告基因检测试剂盒和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）凝胶配制试剂盒（上海碧云天公司），总蛋白提取试剂盒和ECL试剂盒（上海凯基生物公司）。……