李洁媛,李东,童凯,雷雨,姜斌,唐璇,李亚兰

(四川轻化工大学 生物工程学院,四川 宜宾,644000)

红茶是典型的全发酵茶,茶汤醇厚、色泽红艳、香气馥郁,受到消费者广泛喜爱[1]。红茶中的茶黄素(theaflavins,TFs)是影响红茶品质的关键成分,而且在医药、保健、食品、美容等领域有着广泛的应用前景[2]。在红茶发酵的过程中,主要通过细胞的多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)将儿茶素酶促氧化生成TFs[3],但TFs生成量极低且随季节变化波动较大,因此较难直接从红茶中规模化获取。大量研究表明,酶促合成法是工业化生产TFs的一条重要途径,其既能提高产物产量,又能解决季节性限制的问题[4]。酶促合成法是指利用外源(植物源和微生物源)PPO将儿茶素类物质氧化合成TFs[5]。近年,研究多利用PPO粗酶液酶促合成TFs,但粗酶液纯度较低,存在大量杂质和干扰成分会影响TFs的生成[6]。

课题组前期试验发现,多种植物的PPO粗酶液均能酶促合成TFs,但合成能力存在差异。经过初步筛选,试验选择使用分布广泛、价格适宜、PPO含量较高、酶促合成能力较强的马铃薯作为试验材料,分离纯化得到马铃薯PPO纯酶,并分析其酶学性质和酶促合成TFs能力,期望为工业化制备TFs提供指导。

1 材料与方法

1.1 试验试剂

马铃薯,新鲜市售；茶黄素(theaflavin,TF)、茶黄素-3-没食子酸酯(theaflavin-3-gallate,TF-3-G)、茶黄素-3’-没食子酸酯(theaflavin-3’-gallate,TF-3’-G)、茶黄素-3,3′-双没食子酸酯(theaflavine-3,3′-digallate,TFDG),成都德思特生物技术有限公司；SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒,Solarbio科技有限公司；DEAE-Sepharose Fast Flow、茶多酚,上海源叶生物科技有限公司,经本实验室检测其主要成分见表1。

表1 茶多酚的主要成分含量 单位：mg/L