孙连义 白淑玮 李凤至 赵梅生

年龄相关性黄斑变性(AMD)是一种发生于黄斑区视网膜组织的退行性疾病，常导致老年人视力不可逆的下降，严重者甚至失明[1-2]。由于黄斑部代谢率和氧张力高以及活性氧(ROS)的持续产生，其更容易受到氧化刺激，从而诱导视网膜色素上皮(RPE)细胞的损伤，引起光感受器功能障碍和相关的视觉障碍[3-4]。目前研究认为，AMD的主要病因为老化组织中氧化蛋白的积累，脂质和DNA的堆积[5-6]。高浓度氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)已被证明可诱导氧化应激，引起RPE层脂质的沉积，与RPE细胞功能失调及AMD发展密切相关[7-10]。因此，研究ox-LDL引发RPE细胞形成氧化应激的反应过程对揭示AMD的发病机制具有重要意义。

人潜伏转化生长因子β结合蛋白2 (LTBP2)是一种细胞外基质蛋白，被认为在青光眼、晶状体脱落等多种眼科疾病中发挥重要作用[11-12]。此外，沉默LTBP2可以减弱心肌细胞氧化应激损伤、减轻心肌细胞纤维化程度和重构[13]。然而，LTBP2在AMD中的作用目前还未见报道。本实验以人RPE细胞系ARPE-19为研究对象，探索LTBP2对ox-LDL诱导的ARPE-19细胞氧化损伤的影响，以期为进一步揭示ox-LDL诱导氧化损伤的作用机制和开发AMD治疗新靶点提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 实验材料与主要仪器人RPE细胞系ARPE-19购自中国生命科学院。LTBP2过表达质粒(ov-LTBP2)、阴性对照过表达质粒(ov-NC)、LTBP2 siRNA (si-LTBP2)和阴性对照siRNA(si-NC)由广州锐博生物公司合成。Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒和Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂均购自上海碧云天公司；RPMI 1640培养基、胎牛血清购自美国HyClone公司；TRIzol购自日本TaKaRa公司；Lipofectamine 3000试剂和人血管内皮生长因子(VEGF)酶联免疫吸附实验(ELISA)检测试剂盒购自美国Thermo Fisher Scientific公司；……