李湘波 刘艳婷 张永红 蒋殊 周克兵

白内障是目前世界上最常见和最主要的致盲眼病，其发病机制尚不明确。人晶状体上皮细胞(HLEC)凋亡是非先天性白内障形成的细胞学基础。紫外线辐射与白内障的发生和发展密切相关，其中紫外线B(UVB)可穿过角膜和房水被晶状体吸收，从而导致晶状体混浊，诱发白内障[1-2]。研究表明[3]，UVB诱导的HLEC损伤主要表现为氧化损伤以及氧化损伤引起的细胞凋亡。氧化应激是内质网应激(ERS)的主要诱因，细胞内活性氧(ROS)产生过多会诱导内质网内Ca2+释放，进而引发ERS诱导的细胞凋亡。因此，UVB诱导的细胞凋亡很可能是通过激活ERS实现的。Bax抑制因子1(BI-1)是一种能抑制Bax激活的凋亡抑制蛋白，BI-1过表达能通过抑制内质网内Ca2+的释放，抑制ERS诱导的细胞凋亡[4-5]。目前，关于BI-1对UVB诱导下HLEC应激损伤凋亡中的作用，尚未见相关报道。本研究通过观察在UVB照射下HLEC中BI-1表达变化及其过表达对UVB诱导的HLEC凋亡的影响，初步探讨其可能的作用机制，旨在为白内障的预防和治疗提供潜在的生物学靶点。

1 材料与方法

1.1 细胞、主要试剂和仪器HLEC系SRA01/04细胞(中国医科大学附属第四医院眼科晶状体实验室)。BI-1过表达质粒及其空载质粒(上海汉恒生物科技有限公司设计及构建)，反转录试剂盒、实时荧光定量PCR试剂盒(美国Thermo Fisher公司)，LipofectamineTM3000(美国Invitrogen公司)，Mag-Fura-2/AM荧光探针、ROS检测试剂盒、CCK-8检测试剂盒和Annexin V-FITC流式细胞凋亡试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)，αA-晶状体蛋白抗体(美国Snata Cruz公司)，Cleaved-caspase-3、Bax、Bcl-2、GRP78、p-IRE1、p-JNK、Cleaved-caspase-12和GAPDH抗体(美国Abcam公司)，PCR扩增仪(美国Thermo公司)，UV-B型单通道紫外线辐射仪(北京师范大学光电仪器厂)，流式细胞仪(美国Backman公司)。……