王艳婷 金学民 李晓华 赵朝霞

青光眼是一种以视神经损伤、视野缺损、视网膜神经节细胞(RGC)变性或凋亡为特征的视网膜神经病变[1-2]。研究表明，缺血、缺氧、谷氨酸兴奋性毒性、神经营养因子缺乏、氧化应激等均会导致RGC凋亡，引起青光眼[3-4]。N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)通过与细胞表面特异性受体结合，诱发细胞谷氨酸兴奋性毒性和氧化应激反应，通常用NMDA诱导动物青光眼模型或RGC损伤模型[5]。Reelin属于分泌型糖蛋白，与受体结合后可调节神经细胞突触功能[6]。Reelin与神经系统疾病(阿尔茨海默病或帕金森病)的发生密切相关[7-8]。然而，Reelin与青光眼中RGC变性损伤的关系鲜有报道。视网膜被认为是中枢神经系统的一部分，有“外周脑”之称。青光眼患者的视网膜神经病变与阿尔茨海默病等疾病类似，都以神经元的凋亡、变性为特征。本研究我们利用NMDA诱导RGC损伤，制作大鼠青光眼模型，进而探讨Reelin在青光眼发生中的作用。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器大鼠RGC-5(中国科学院上海细胞库)，含双抗的DEME培养基、不含双抗的DEME培养基、胎牛血清(上海碧云天生物技术有限公司)，NMDA、糖原合成酶激酶-3 (GSK-3)小鼠单克隆抗体、山羊抗鼠IgG二抗(英国Abcam公司)，Annexin V FITC/碘化丙啶(PI)凋亡试剂盒(德国美天旎公司)，兔抗鼠Reelin一抗(PA5-78413)、兔抗鼠磷酸化-Tau蛋白(p-Tau)一抗、鼠抗鼠细胞周期素依赖蛋白激酶5(CDK5)一抗、山羊抗兔IgG二抗(美国Invitrogen公司)，Reelin抑制物、Reelin类似物和Reelin阴性对照序列由上海吉玛基因公司合成，Trizol试剂、Lipofectamine 2000(美国Sigma公司)。

1.2 实验分组将大鼠RGC-5分为对照组、NMDA组、Reelin类似物组、Reelin阴性对照组和Reelin抑制物组。……