高 越，刘伯玉，任翠平，高 勇，朱 禹，杨 莉，温 萌，钱 振，芦宝静，柳 燕

新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 19，COVID-19)是由严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2)引起的急性传染病。此次疫情在全球范围内快速蔓延，WHO已将其认定为国际公共卫生紧急事件。冠状病毒(coronavirus，CoVs)是一种有包膜的单链正链RNA病毒，隶属于冠状病毒科。病毒基因组中16个非结构蛋白由5′端的开放阅读框架(ORF)1a/b编码，而结构蛋白包括刺突蛋白(S)、包膜蛋白(E)、膜蛋白(M)和核衣壳蛋白(N)则由3′端的其他ORF编码。由于潜伏期长，感染者的早期症状无特异性，且存在无症状感染者，极易造成漏诊或误诊，因此，建立更便捷、快速的分子检测方法，为临床提供精准诊断具有重要意义。

该研究建立的反转录重组酶介导核酸扩增(reverse transcription recombinase aided amplification，RT-RAA)技术是一种等温快速扩增检测方法，通过是选择SARS-CoV-2的

S

基因和

orf1ab

基因，设计特异性等温扩增引物和探针，建立了SARS-CoV-2快速诊断的分子检测方法，并进行初步评价。

1 材料与方法

1.1 材料

1

.

1

.

1

样本 收集2020年1月20日—2月28日的临床确诊感染SARS-CoV-2患者咽拭子标本30例来自于项目合作单位安徽省阜阳市第二人民医院，COVID-19的诊断依据是中国国家卫生委员会发布的新的《冠状病毒肺炎防治方案(第五版)》；另外临床呼吸道感染咽拭子标本30份为2019年底前本实验室收集，经核酸检测分别包括H9N2(3例)、H7N9(2例)、H3N2(5例)、H1N1(6例)、B型流感(6例)、RSV(3例)、RV(5例)。纳入研究的所有患者都知情同意，经安徽医科大学人类生物伦理学委员会批准，批准号为2020H015。

1

.

1

.

2

主要仪器及试剂 体外转录试剂盒RiboMAXLarge Scale RNA Production System-T7(美国Promega公司，货号：P1300)；二级生物安全柜、GENCHECK-1荧光检测仪(杭州众测生物科技公司)；……