潘琪伟，陈韦璁，裴冬生，王庆苓

结直肠癌(colorectal cancer，CRC)是常见的消化道恶性肿瘤，在全球范围内，结直肠癌是男性和女性的第三大癌症，每年超过69万例死亡，且该病的患者群逐渐趋向年轻化。因此，深入探讨结直肠癌发病及转移的分子机制，寻找新的治疗靶点，对治疗结直肠癌具有重要的意义。氧化固醇结合蛋白相关蛋白8(oxysterol binding protein-related protein 8，ORP8)隶属于一类存在于真核细胞内的参与脂质代谢的非囊泡运输蛋白质——氧化固醇结合蛋白(oxysterol binding protein，OSBP)家族，已有研究表明，ORP8在肝癌、胃癌、非小细胞型肺癌等肿瘤中介导的信号转导在肿瘤细胞的增殖、凋亡的过程中起着重要作用，然而至今，结直肠癌患者中ORP8的表达水平及其对结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力影响的研究尚无报道。该研究旨在通过从体外低表达或过表达 ORP8在结直肠癌细胞中的水平来探讨其对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。

1 材料与方法

1.1 实验细胞

人结直肠癌DLD-1细胞购自中国科学院细胞研究所。

1.2 ORP8表达质粒和ORP8 siRNA片段

针对人ORP8 mRNA的表达质粒pcDNA3.1-ORP8由本科室保存。针对人ORP8 mRNA的siRNA片段5′-GAGUGGUCUUGCAAAUUAUTT-3′及无关序列siRNA购自吉玛生物科技有限公司。

1.3 实验试剂

兔抗人细胞外蛋白调节激酶(extracellular regulated protein kinases，ERK1/2)多克隆抗体、兔抗人磷酸化细胞外蛋白调节激酶(phosphorylated-extracellular regulated protein kinases，p-ERK1/2)多克隆抗体、兔抗人Vimentin多克隆抗体购自美国Cell Signaling Technology公司；鼠抗人ORP8单克隆抗体、鼠抗人p-ERK1/2单克隆抗体购自英国Abcam公司；鼠抗人β-actin、山羊抗鼠二抗、山羊抗兔二抗、鼠抗人E-cadherin多克隆抗体、兔抗人N-cadherin多克隆抗体购自美国proteintech公司；转染试剂Lipofectamine 2000购自美国Invitrogen公司；……