夏 玉，王 维，邓铂林，高玉英，李 静

视网膜母细胞瘤(retinoblastoma，Rb)是儿童最常见的原发性眼内恶性肿瘤，典型表现为白眼或斜视。Rb的治疗是多模式的，包括化疗 (静脉内化疗和动脉内化疗)、放射治疗、手术治疗及病灶治疗包括经瞳孔热疗、冷冻治疗和激光光凝等。越来越多的证据表明，微小RNA(MicroRNA,miRNA)在肿瘤发生过程中起着抑癌基因或致癌基因的作用。研究表明miR-30、miR-let-7e、miR-21和miR-320在Rb中表达失调，是诊断Rb的生物标志物。miR-188-5p 在Rb组织中表达量上调，并抑制DNA结合抑制因子(DNA binding 4，ID4)的表达，从而加快Rb的发展进程。该文主要通过检测异泽兰黄素对miR-188-5p的表达影响及对Rb的细胞侵袭、细胞凋亡的影响。

1 材料与方法

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1 细胞培养与处理

Rb Y79细胞购自中国科学院的细胞库，并用含10%胎牛血清的Dulbecco改良的Eagle培养基(Dulbecco′s modified eagle medium，DMEM)进行培养于37 ℃生长。miR-188-5p mimic和miR-NC根据制造商的说明，使用Lipofectamine 2000试剂(Invitrogen，美国Thermo Fisher Scientific公司)转染到SU-DHL-4细胞。

1.2 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物比色 [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]法检测细胞活性

在96孔板中，将Rb Y79细胞分别用不同浓度异泽兰黄素(1、2.5、5、10、20、40、100、200、300 μmol/L)处理24 h时，再用10 μl MTT染料处理细胞，然后与100 μl二甲基亚砜孵育15 min，用酶免疫分析仪在490 nm处测量吸光度。用各浓度处理组细胞吸光度值与1 μmol/L组细胞吸光度值的比值表示细胞活性。

1.3 miR-188-5p mimic转染及分组

将Y79细胞分为3组：① Control组：Y79细胞不做任何处理；② mimic-NC组：通过Lipofectamine® 2000将mimic-NC转染到Y79细胞；③ miR-188-5p mimic组(mimic转染组)：通过Lipofectamine® 2000将miR-188-5p mimic转染到Y79细胞。转染48 h后， RT-qPCR检测miR-188-5p转染效率。然后将Y79细胞分为4组， ① Control组：Y79细胞不做任何处理；② 40 μmol/L异泽兰黄素组：Y79细胞用40 μmol/L浓度的异泽兰黄素处理24 h时；③ mimic转染组：通过Lipofectamine® 2000将miR-188-5p mimic转染到Y79细胞；④ mimic转染+40 μmol/L异泽兰黄素组：通过Lipofectamine® 2000将miR-188-5p mimic转染到Y79细胞，然后用40 μmol/L浓度的异泽兰黄素处理24 h时。……