张理火 何丽娟 刘璐

摘 要 目的：建立高效液相色谱法测定猪凝血酶中蔗糖含量，并进行方法学验证。方法：根据分子排阻色谱法，以亲水硅胶高效体积排阻色谱柱进行分离，采用示差折光检测器测定蔗糖含量。结果：该方法专属性强，线性范围为0.518～1.658 mg/ml；低、中、高3组浓度蔗糖的平均回收率分别为98.74%、99.35%、100.22%，总平均回收率为99.44%（n=9），相对标准偏差（RSD）为0.82%（n=9）；中间精密度RSD为1.65%（n=12）。结论：该方法专属性强，准确度、精密度、耐用性良好，适用于猪凝血酶中蔗糖含量测定。

关键词 高效液相色谱法 猪凝血酶 蔗糖

中图分类号：R973.1； O657.72 文献标志码：A 文章编号：1006-1533（2021）07-0072-04

Determination of sucrose content in porcine thrombin by HPLC

ZHANG Lihuo1，2*， HE Lijuan2， LIU Lu1，2**

（1. Shanghai Haohai Biotechnology Co.， Ltd.， Shanghai 201613， China； 2. Shanghai Li Kang Rui Biological Engineering Co.， Ltd.， Shanghai 201707， China）

ABSTRACT Objective： To establish a method for the determination of sucrose content in porcine thrombin by HPLC. Methods： Based on molecular exclusion chromatography and hydrophilic silica gel column with high efficiency volume exclusion chromatography， the content of sucrose in porcine thrombin was determined by refractive index detector （RID）. Results： The method had strong specificity and the linear range was 0.518-1.658 mg/ml. The average recoveries at low， medium and high concentrations of sucrose were 98.74%， 99.35% and 100.22%， respectively and the overall average recovery was 99.44% （n=9）， and the overall relative standard deviation （RSD） was 0.82% （n=9）. The RSD obtained from the intermediate precision was 1.65%（n=12）. Conclusion： This method with good specificity， accuracy， precision and durability is suitable for the determination of sucrose content in porcine thrombin.

KEy WORDS HPLC； porcine thrombin； sucrose

豬源纤维蛋白黏合剂由猪纤维蛋白原、猪凝血酶及相应溶解液组成，是临床常用的辅助止血药[1]。猪凝血酶由健康猪混合血浆，经分离、提纯、病毒灭活（S/D灭活和干热灭活）、冻干等制成，其中干热病毒灭活和冻干过程易致使蛋白变性，需加入蛋白保护剂。目前国内使用的保护剂包括单独使用蔗糖、使用一种或多种氨基酸或者蔗糖和氨基酸联合使用等[2]。蔗糖是生物制品中常用的保护剂，具有赋形和抗氧化的作用，其含量与制品的稳定性息息相关[3-4]。2015年版《中国药典》四部通则<3120>人血液制品中糖及糖醇含量测定方法采用离子色谱法[5]，但蔗糖在高温干热灭活过程中易发生碳化或水解，表现为非单一的色谱峰，且与制品中常用的抗凝剂-枸橼酸离子峰存在干扰，导致无法准确测定[2]。另外，药典方法中供试品溶液的处理过程需加入磺基水杨酸除蛋白，但蔗糖在此酸性条件下易缓慢水解成果糖和葡萄糖，致使主峰下降、定量不准确[2]。……