任欢欢，杨 瑜，徐洪宝，王忠迈，程 宗，梁 猛，王春景，廖亚平

纺锤体组装检查点(spindle assembly checkpoint，SAC)是细胞周期调控中的众多检查点之一，有助于维持细胞有丝分裂期间基因组稳定性，SAC结构功能异常是导致染色体不稳定性与非整倍体的重要原因之一，Mad2、Bub1、BubR1是SAC中的关键组分。

叶酸是一碳代谢循环中重要的甲基供体，在DNA合成、稳定性及修复中起关键作用。其缺乏会导致DNA损伤、染色体和基因组不稳定等。叶酸缺乏会对损坏SAC网络，从而致使细胞发生有丝分裂异常与非整倍性[1]，但是非整倍体发生的机制尚不明确且叶酸缺乏对SAC影响的报道较少。本研究通过探索不同浓度叶酸对L02细胞增殖、凋亡及Mad2、Bub1、BubR1 mRNA及蛋白水平的影响，并讨论可能的作用机制。

1 材料与方法

1.1 细胞及试剂 L02细胞(武汉普诺赛细胞库)；无叶酸RPMI-1640培养基、胎牛血清(Gibco公司)；叶酸粉末(Sigma公司)；Annexin V-FITC/PI试剂盒、细胞周期试剂盒、BCA蛋白定量试剂盒、RIPA裂解液、PMSF(江苏碧云天生物有限公司)；Mad2、Bub1、BubR1抗体(美国Bethyl公司)；β-actin抗体(Cell Signaling Technology 公司)；辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG抗体、辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠IgG抗体(武汉博士德生物工程有限公司)；荧光定量PCR试剂盒(Takara公司)；Mad2、Bub1、BubR1引物(上海生工生物有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 细胞分组及处理 将L02细胞培养于含5%胎牛血清的RPMI-1640培养基中，置于37 ℃、5% CO2的细胞培养箱中。将细胞分为正常对照组和不同浓度叶酸组(分别给予200 nmol/L、20 nmol/L和0 nmol/L叶酸处理2周)。

1.2.2 倒置显微镜下观察细胞形态 倒置显微镜下观察不同浓度叶酸培养2周后的L02细胞形态。

1.2.3 CCK8法检测细胞活性 将培养第12天的L02细胞按3.0×103个/孔接种于96孔板，各组3孔，过夜贴壁后，每孔加入10 μL CCK8试剂后置于培养箱中培养2 h，并于450 mm处检测吸光度(OD)值。……